Isolamento del DNA microbico delle feci: studio dell'effetto dell'arricchimento ambientale sulla diversità del microbioma nel modello di tumore murino

- L'arricchimento ambientale, o EE, si riferisce alle modifiche dei parametri abitativi per ottenere effetti benefici su varie malattie come il cancro. In un topo portatore di tumore, l'EE attiva il sistema immunitario e riduce l'infiammazione, migliorando il microbiota intestinale e il tasso di sopravvivenza. Per studiare i cambiamenti nel microbiota intestinale, aggiungere la quantità desiderata di tampone per la lisi delle feci in una provetta contenente le feci del topo.

Centrifugare il campione e trasferire il surnatante in una nuova provetta da microcentrifuga. Aggiungere il tampone di lisi del cloruro di guanidinio che denatura la DNasi e la RNasi. Quindi, aggiungere etanolo e trasferire il campione in una colonna di centrifuga di silice.

L'etanolo aiuta il DNA a legarsi alla silice. Centrifugare il campione. A questo punto, trasferire la colonna in una nuova provetta da microcentrifuga e aggiungere un tampone di eluizione alla colonna per eluire il DNA.

Centrifugare il campione e scartare la colonna. Trasferire il campione in una provetta PCR ed eseguire la PCR per amplificare il DNA. Caricare il DNA su gel di agarosio ed eseguire l'elettroforesi per quantificare le dimensi