Saggio di citometria da trazione: un metodo per quantificare la forza di trazione esercitata dalle cellule tumorali sulla ECM

- Le cellule generano forze meccaniche che agiscono su una matrice extracellulare. Questa forza è chiamata forza di trazione. Le cellule esercitano forze di trazione per svolgere vari compiti come la migrazione e la proliferazione.

Le cellule tumorali metastatiche esercitano forze di trazione maggiori rispetto alle cellule sane; pertanto, eseguiamo un test di citometria di trazione per misurare le forze di trazione esercitate dalle cellule su substrati elastici. Inizia seminando la quantità desiderata di cellule tumorali del colon su un idrogel di poliacrilammide, un gel che imita la ECM in vitro. Il gel comprende proteine fibronectina, che aiutano le cellule ad aderire alla superficie, e perline fluorescenti, che fungono da marcatore per i cambiamenti di posizione.

Incubare le cellule per il periodo desiderato. Le cellule aderiscono al gel ed esercitano la forza di trazione, che provoca lo spostamento delle perle fluorescenti. Ora, posiziona la piastra sotto un microscopio fluorescente e scatta un'immagine delle perle fluorescenti spostate. Successivamente, aggiungere la quantità desiderata di tripsina alla piastra per staccare le cellule e analizzare la forza di trazione esercitata dalle cellule utilizzando un software appropriato. Nel seguente protocollo, eseguiremo un saggio di microscopia della forza di trazione per analizzare la trazione cellulare delle cellule tumorali del colon umano.

- Per eseguire il test al microscopio della forza di trazione, riscaldare prima la soluzione SDS allo 0,25% di tripsina-EDTA al 10% a 37 gradi Celsius in un bagno d'acqua per 10 minuti prima dell'inizio dell'esperimento di trazione. Rimuovere un gel alla volta dall'incubatore per colture cellulari e posizionarlo sul tavolino del microscopio. Dopo aver trovato una singola cellula nel campo visivo, rimuovere il coperchio della piastra di Petri e scattare un'immagine a contrasto di fase della cellula.

Quindi, passare dalla modalità di imaging alla fluorescenza e selezionare il filtro appropriato. Non spostare il tavolino del microscopio o il campione durante questo periodo. Quindi, scatta un'immagine delle perle fluorescenti spostate dalla trazione cellulare. Ora, aggiungi 1 millilitro di soluzione di tripsina SDS alla piastra di Petri per staccare la cellula dal gel. Scatta un'immagine di riferimento delle perline dopo che la cella è stata rimossa.