Modello murino sperimentale di melanoma metastatico: una piattaforma per studiare il potenziale metastatico delle cellule di melanoma nei polmoni

- I modelli sperimentali di metastasi aiutano a valutare il potenziale delle cellule tumorali di stravasare e proliferare in particolari siti dopo l'iniezione intravascolare. Per iniziare, preparare una sospensione unicellulare di cellule di melanoma nella concentrazione desiderata utilizzando un terreno appropriato. Caricare la sospensione in una siringa.

Quindi, trattieni un topo in una camera e fissalo in modo che la sua coda sia accessibile. Ruota il mouse di 90 gradi per visualizzare la sua vena laterale. Utilizzare una lampada riscaldante per aumentare la temperatura ambiente per dilatare la vena caudale. Ora, inserisci l'ago verso l'estremità distale della coda e inietta la sospensione di cellule di melanoma preparata nella vena dilatata.

Le cellule tumorali metastatiche iniettate migrano attraverso il sistema circolatorio. Alla fine, alcune di queste cellule si estraggono dalla circolazione in organi distanti come i polmoni. Queste cellule tumorali si adattano al loro nuovo microambiente per proliferare e stabilire focolai metastatici sperimentali.

Nel seguente protocollo, dimostreremo l'iniezione nella vena caudale di cellule di melanoma B16-BL6 in un modello murino per studiare il loro potenziale metastatico.

- Dopo che tutte le sospensioni cellulari B16-BL6 sono state preparate, selezionare un mouse. Tenendolo per la coda, guida l'animale, all'indietro, in un sistema di contenimento. Quando il busto del topo si trova nella camera principale e la coda all'esterno dell'apparecchio, procedere a tirare l'animale verso l'estremità del sistema di contenzione.

Quindi, inserire lo stantuffo di ritenuta e continuare a spingere sullo stantuffo finché il mouse non è sicuro. Una volta che l'animale è in posizione, ruota il topo di 90 gradi in modo che una delle vene laterali della coda sia rivolta verso l'alto. Quindi, usa un tampone imbevuto di alcol per pulire energicamente il lato della coda del topo dove la vena è più visibile.

Per prepararsi all'iniezione, raccogliere in una siringa 300 microlitri di 0,5 milioni di cellule per millilitro di sospensione. Successivamente, espellere le bolle dalla siringa capovolgendolo, muovendo il lato e spingendo lo stantuffo. Una volta rimosse le bolle, espellere la coltura cellulare per ottenere un volume finale di 250 microlitri nella siringa.

Procedi ad estendere la coda del topo con la mano non dominante. Tienilo in modo che l'indice sollevi l'estremità prossimale della coda e il pollice prema la parte distale. Con la mano dominante, inserire l'ago nella vena verso l'estremità distale della coda, con un angolo minuto verso il basso. Quindi, inserisci ulteriormente l'ago, regolandolo in modo che corrisponda all'angolo della vena caudale.

Dopo che l'ago è stato inserito, a circa 1 centimetro nella vena caudale, iniziare a spingere lo stantuffo tenendo ferma la siringa. Fermare qualsiasi sanguinamento tenendo una garza contro il sito di ingresso. Una volta espulsa la sospensione cellulare, rimuovere l'ago dalla vena e gettarlo. Quindi, rimuovere lo stantuffo dal sistema di ritenuta e posizionare il mouse in una gabbia ricevente.

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