Preparazione di una coltura emolitica di Staphylococcus aureus per studi di interazione ospite-patogeno

Inizia con una piastra agar nutriente selettiva integrata con sangue contenente globuli rossi.

Striscia Staphylococcus aureus (S. aureus), un batterio patogeno Gram-positivo, sull'agar e incuba.

Durante l'incubazione, i batteri utilizzano nutrienti, crescono e formano colonie.

S. aureus secerne emolisina, una tossina formatrice di pori che lisa i globuli rossi nell'agar e produce zone chiare e trasparenti intorno alle colonie, indicativa di emolisi.

Seleziona una colonia emolitica, inoculala in un brodo di nutrienti e incuba in condizioni rotative per supportare la crescita batterica.

Utilizzando uno spettrofotometro, misura la densità ottica (OD) per determinare la concentrazione batterica.

In base alla lettura OD, trasferisci un'aliquota in un brodo nutriente fresco per diluire le cellule e incuba in un bagno d'acqua con scuotere.

Misura il diametro oculare a intervalli regolari.

Un OD vicino a 0,8 indica che i batteri hanno raggiunto la fase di crescita esponenziale con una fisiologia uniforme.

Questo S. aureus emolitico è pronto per studi di interazione ospite-patogeno.

Inizia con la striatura S. Ceppi aureus di interesse su piastre di agar nel sangue da una scorta di glicerolo congelato e incubando le placche a 37 gradi Celsius per 16-24 ore per confermare i loro fenotipi emolitici basati sulla loro capacità di lisare i globuli rossi e formare zone trasparenti e chiare.

Inoculare isolati singoli di ogni ceppo in 4 millilitri di brodo di soia triptico, o TSB, in tubetti di vetro sterili e ruotare i tubi a 37 gradi Celsius per 16-24 ore in un rullo a tubo a un angolo di circa 70 gradi e 70 rotazioni al minuto. La mattina seguente, misura la densità ottica a 600 nanometri, ovvero_{OD 600}, delle colture con uno spettrofotometro e diluisci le cellule a un OD₆₀₀ di 0,05 in 25 millilitri di TSB sterile con un rapporto 5 a 1 fiaschella/volume in fiasche DeLong da 125 millilitri. Incubare le colture in un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius a 280 rotazioni al minuto.