Visualizzazione dello stress ossidativo indotto da patogeni in C. elegans utilizzando SKN-1 marcato con GFP

Si inizia con due piastre contenenti vermi C. elegans che esprimono SKN-1 con proteine fluorescenti verdi, un fattore di trascrizione localizzato nel citoplasma intestinale. Questi vermi contengono anche granuli di lipofuscina intestinale che mostrano autofluorescenza.

Una piastra è seminata con batteri non patogeni come gruppo di controllo, l'altra con batteri patogeni come gruppo di test.

Nel gruppo di prova, il perossido di idrogeno prodotto dal patogeno induce stress ossidativo, scatenando la traslocazione di SKN-1 nei nuclei intestinali.

Nel gruppo di controllo, la maggior parte di SKN-1 rimane diffusamente distribuita nel citoplasma.

Lava ogni piastra con un tampone e trasferisci i vermi nei tubi.

Centrifuga per separare i lombrini e rimuovere il tampon.

Aggiungi un mezzo contenente azida di sodio per anestetizzarli.

Montare i vermi su cuscinetti di agarosio, posizionare le coperture e osservare al microscopio a fluorescenza. Usa l'autofluorescenza per visualizzare i confini nucleari.

Un forte segnale nucleare SKN-1 nel test, rispetto al segnale citoplasmatico diffuso nei controlli, indica la rilocalizzazione nucleare e conferma lo stress ossidativo indotto dal patogeno.

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