Sezionamento, colorazione e imaging TEM di esosomi incorporati: un protocollo per visualizzare le caratteristiche strutturali degli esosomi utilizzando TEM

Gli esosomi sono vescicole sferiche nanozzate racchiuse da un doppio strato lipidico contenente DNA, RNA e molecole proteiche presenti all'interno del lume.

Per visualizzare la struttura dell'esosoma utilizzando la microscopia elettronica a trasmissione, o TEM, iniziare prendendo un blocco di esosomi, un blocco di matrice solida contenente gli esosomi incorporati. Utilizzando un ultra-microtomo, ottenere sezioni ultrasottili del blocco dell'esosoma.

Raccogliere la sezione dell'esosoma su una griglia adatta e lasciarla aderire alla superficie. La griglia fornisce un supporto stabile al campione di esosoma per le successive fasi di colorazione.

Quindi, posizionare la griglia su una goccia di acetato di uranile - una macchia di metallo pesante - e incubare per la durata desiderata. Gli ioni uranile interagiscono con i lipidi, le proteine, il DNA e gli RNA presenti negli esosomi.

Successivamente, colorare la sezione dell'esosoma con citrato di piombo, che si lega anche alle biomolecole esosomiali. Il citrato di piombo si lega debolmente agli ioni uranile pre-legati e migliora il contrasto sullo sfondo durante l'imaging.

Osservare gli esosomi doppiamente colorati utilizzando TEM. La TEM