Saggio di perdita di fluorescenza per studiare l'interazione del peptide che penetra nelle cellule con la membrana

I peptidi che penetrano nelle cellule, CPP, peptidi corti e caricati positivamente, possono interagire e attraversare le membrane cellulari, facilitando la consegna di carichi impermeabili alle cellule.

Per studiare il potenziale di permeabilizzazione della membrana di un test CPP in vitro utilizzando un imitatore della membrana cellulare, iniziare con una grande vescicola unilamellare, LUV, sospensione.

I LUV comprendono un doppio strato fosfolipidico caricato con una sonda fluorescente impermeabile alla membrana e una corrispondente coppia di quencher. All'interno delle vescicole, il quencher interagisce con la sonda fluorescente a causa della loro vicinanza, causando il quencing della fluorescenza.

Pipettare la sospensione LUV in una cuvetta a fluorescenza al quarzo e diluire con il tampone. Aggiungi una barra magnetica. Trasferire su uno spettrofluorimetro con agitazione magnetica per prevenire la sedimentazione dei LUV durante la corsa. Determinare la fluorescenza di fondo per eliminare eventuali perdite di LUV.

Aggiungere la concentrazione desiderata di CPP alla sospensione LUV a intervalli regolari.

Sulla base dell'idrofobicità e della carica dei residui amminoacidici dei CP