Esaminare il comportamento di chemioevitazione nei vermi transgenici utilizzando il saggio di evitamento osmotico

Nei nematodi, i neuroni chemiosensoriali (ASH) possono percepire i cambiamenti di osmolarità nell'ambiente circostante causati da repellenti chimici. In risposta, questi vermi si allontanano dai repellenti, portando a un comportamento di chemioevitamento.

L'aggregazione anormale delle proteine all'interno dei neuroni ASH può portare ad alterazioni del comportamento di chemioevitamento.

Per esaminare il comportamento di evitamento osmotico nei vermi, iniziare con larve di nematodi transgenici con aggregati proteici nei neuroni ASH. Trattare i nematodi con composti bioattivi che riducono l'aggregazione proteica e ripristinano il comportamento di evitamento in alcuni vermi.

Trasferire i vermi trattati su una piastra di terreno pre-preparata e priva di alimenti per mantenerli allo stadio larvale. La piastra ha il glicerolo, una sostanza chimica ad alta forza osmotica, presente al centro, creando una barriera osmotica per dividere la piastra in due zone, una normale e una zona trappola.

Integrare la zona della trappola con l'anestesia per fermare il movimento dei vermi che attraversano la barriera. Aggiungi una goccia di butandione nella zona della trappola per attirare tutti i vermi, facendoli muovere verso di essa.

I vermi con aggregazione proteica non possono percepire lo stress osmotico, attraversare la linea di barriera e rimanere anestetizzati nella zona della trappola. I vermi con comportamento chemioevitato ripristinato si allontanano dal glicerolo e rimangono all'interno della zona normale.

Il numero di vermi nella zona normale è correlato all'efficacia dei composti bioattivi nel ripristinare il comportamento di chemioevitamento.

Per il saggio di evitamento osmotico, dividere una piastra NGM senza cibo in zone normali e di trappola, creando una linea di glicerolo a 8 molari al centro. Quindi, stendere una linea di sodio azide da 200 millimolari a circa 1 centimetro di distanza dalla linea del glicerolo per paralizzare i nematodi che attraversano la barriera del glicerolo nella zona della trappola.

Trasferire circa 200 nematodi ciascuno sulla zona normale di tre piastre replicate per ogni gruppo. Quindi, aggiungi una goccia di butandione all'1% sulla zona della trappola per attirare i nematodi. Copri immediatamente il coperchio della capsula di Petri e incuba a 23 gradi Celsius per 90 minuti.

Segna il numero di nematodi su entrambe le zone al microscopio e calcola l'indice di evitamento.