Name: Evitare osmotica Caenorhabditis elegans: Funzione sinaptica di due geni, ortologhi di Human NRXN1 E NLGN1, Come candidati per lautismo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-11T16:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Scopri la funzione sinaptica di neurexine e neuroligine in Caenorhabditis elegans per studiare i meccanismi sensoriali legati all'autismo. Questo metodo rivela interazioni genetiche cruciali nel sistema nervoso.

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Vorremmo ringraziare il dottor Antonio Miranda-Vizuete per il suo prezioso aiuto. Ci piace anche esprimere la nostra gratitudine a Salma Boulayoune e Isabel Caballero per una valida assistenza tecnica. Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione della Junta de Andalucía (BIO-272). Questa ricerca è stata effettuata in accordo con le leggi vigenti che disciplinano la sperimentazione genetica in Europa.

1: test di evitamento osmotica. <ol><li> Circa 16-24 ore prima del test, raccogliere L4 animali stadio larvale di ciascun genotipo per un piatto fresco NGM contenente OP50 E. coli che andincubate a 20 ° C. Il giorno dopo inizia l'esperimento con i giovani adulti. </li><li> Si consiglia di effettuare il test "alla cieca". Le piastre con ogni sforzo per essere analizzati devono essere rietichettate da uno sperimentatore secondo, eseguendo il test con le piastre rietichettati che sarebbe stato smascherato quando l'esperimento è terminato. </li><li> Il giorno del test, preparare una soluzione 4M stock di fruttosio con 1% di soluzione di Rosso Congo e sciogliere completamente a temperatura ambiente. Si consiglia di verificare la soluzione prima di ogni test in quanto il colorante potrebbe precipitare con il tempo. </li><li> Anello anulare (1 cm di diametro) sulla piastra NGM è delineata al centro del terreno solido, con 15 microlitri della soluzione rosso fruttosio 4M. Lasciate che la soluzione di fruttosio penetrare nel agar, questo avviene di solito tra i 2 ei 5 minuti. </li><li> Luogo singoli animali adulti giovani di ogni ceppo all'interno della circonvallazione e seguire nei prossimi 10 minuti per determinare la risposta alla barriera osmotica. Animali evitando l'anello più di sei volte di fila sono classificati come normali, quelli in uscita l'anello in meno di sei tentativi sono considerati difettosi nella sensibilità osmotica. Nota: il ceppo di controllo deve essere utilizzato in ogni test. Animali adulti N2 giovani vengono utilizzati come controlli positivi in ​​quanto decisamente evitare la barriera anello. Gli animali che sono stati precedentemente fame, passato attraverso Dauer larve o sono provenienti da piatti che sono troppo secche non deve essere utilizzato. All'inizio, animali di controllo devono essere valutati in duplice copia, a confermare che le piastre di analisi e la soluzione siano corretti. </li></ol> 2: Generazione di vermi knockdown alimentando RNAi. <ol><li> RNAi piastre: piastre NGM alimentazione RNAi contiene per litro: 17 g di agar, 2,5 g di peptone, 3,0 g NaCl, 1 ml di 5 mg di colesterolo ml -1; riempire il pallone a 1 litro con H 2 O e autoclave. Dopo agar si raffredda fino a circa 65 ° C, aggiungere 25 ml di 1 M KPO 4, pH 6.0, 1 ml di 1 M CaCl 2, 1 ml di 1M MgSO 4, carbenicillina 0,5 ml (50 mg ml -1) e 1 ml 1M IPTG. Se siete pronti a partire con NGM solide, si fondono terreno solido da microonde e successivamente posto NGM liquido in panchina per raffreddare e poi aggiungere KPO 4, pH 6.0, CaCl 2, MgSO 4, carbenicillina e IPTG come indicato in precedenza. Aggiungere 10 ml di NGM in ogni piatto 60 millimetri Petri. Lasciare raffreddare e capovolgere le piastre mantenimento delle stesse in una notte prima dell'uso RT. Le piastre possono essere conservate in un sacchetto di plastica a 4 ° C per circa 4-5 giorni. </li><li> Preparazione batterica e induzione: Isolare le colonie di E.coli HT115 (DE3) ceppo, trasformato con L4440 vettore contenente un frammento corrispondente al gene bersaglio, su Luria-Bertani (LB) piastre di agar (17 agar g, 10 g di triptone, 5 g estratto di lievito e 10 g di NaCl per litro) contenente ampicillina (50 mg / ml) e tetraciclina (15 mg / ml). Scegli una colonia di batteri e inoculare in LB con 50 mg / ml ampicillina, e destinata alla produzione di 6 8 ore con agitazione a 37 ° C; seme una goccia di questa cultura sulle piastre NGM preparato e asciugare i piatti accuratamente prima di essere incubazione overnight ( 12 24 h) a temperatura ambiente per permettere ai batteri di crescere e di iniziare a induzione. L'incubazione era al buio perché tetracicline è sensibile alla luce e può influenzare la variabilità dei saggi RNAi tra i piatti. E 'necessario utilizzare un positivo e un controllo negativo per esperimenti di alimentazione RNAi. Il controllo positivo è E.coli HT115 cellule trasformate con il vettore L4440 contenente la sequenza del gene unc-22. L'atterramento di unc-22 gene produce un "fenotipo spasmi". Il controllo negativo è E.coli HT115 cellule trasformate con vuoto vettore L4440. </li><li> Gestione verme e punteggio: Il primo giorno, luogo L4 vermi palco da una piastra NGM seminato con OP50 su piastre NGM senza batteri e incubare a 20 ° C per 12 ore (a digiuno). Il giorno dopo, il trasferimento di giovani adulti ermafroditi digiuno su un piatto seedded con i batteri che esprimono il gene bersaglio specifico RNAi. Lascia 40-48 ore a 20 ° C per generare progenie F1. Poi inserire un paio di vermi adulti F1 su un altro piatto seminato con i batteri stessi. Dopo 24-48 ore, selezionare e isolare dalla progenie F2, i giovani adulti (completamente formato vulva sporgente con le uova pochi) e punteggio per fenotipi. Nota: l'induzione RNAi nei neuroni hanno alcune limitazioni a causa delle proprietà refrattario del sistema nervoso C. elegans a RNAi.. Per superare i problemi di questa inefficienza nel neurone si raccomanda di utilizzare il rif-3 ceppo, uno sfondo ipersensibili agli effetti di RNAi nei neuroni 10. Nei nostri esperimenti non differences sono stati trovati tra Bristol N2 e rif-3 ceppi per i geni e il fenotipo analizzati. </li></ol> 3: I ceppi utilizzati. Il C. elegans ceppi utilizzati in questo lavoro sono riportati nella tabella 1. Ceppi mutanti erano fuori incrociata contro N2 selvaggio - Tipo di almeno quattro volte per rimuovere i mutazioni casuali che avrebbero potuto essere generati durante il protocollo di mutagenesi. . OP50 E coli ceppo è stato suppliied da Caenorhabditis Genetic Center, University of Minnesota, USA E.coli HT115 (DE3) con il plasmide pL4440 portando NRX-1 (JA: C29A12.5). NLG e-1 (JA: C40C9.5 frammenti di geni) sono stati forniti dal Dott. Peter Askjaer, Centro Andaluz de Biologia del Desarrollo (Abd), CSIC Universidad Pablo Olavide, Siviglia, Spagna. 4: I risultati rappresentativi. Risultati illustrativo sono rappresentati nelle figure 1 e 2. Dieci animali di ogni ceppo e un minimo di tre esperimenti replica sono state effettuate. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/1616/1616Fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Esperimenti di comportamento di evitamento osmotica. Ceppi di controllo e NRX-1 (ok1649 e tm1961) mutantworms V carenti rispondere invertendo indietro quando incontrano una barriera osmotica (4M fruttosio). NLG-1 (ok259 e tm474) X mutanti non riescono a rilevare questa barriera. Doppi mutanti carenti di NLG-1 e NRX-1, ceppi CRR21 (ok1649; ok259) VX e CRR23 (tm1961; ok259) VX recuperato il fenotipo wild type. Il simbolo * indica differenze significative (p ≤ 0,001) da t-student test, nella risposta di ogni sforzo per la N2 Bristol wild-type da t-studente di prova <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/1616/1616Fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Gli esperimenti con i vermi knockdown alimentando RNAi. E.coli HT115 (DE3) trasformato con vuoti vettore pL4440 o contenente un frammento corrispondente ai geni bersaglio NRX-1 o NLG-1 sono stati utilizzati per ceppi di vite senza fine alimentato diverse. Il simbolo * indica differenze significative (p ≤ 0,001) da t-student test, nella risposta del ceppo N2 alimentato con i batteri portando la pL4440 vettore con un frammento intese a promuovere l'NLG-1 gene in confronto con il ceppo N2 alimentato con vuoto pL4440 vettore .

<ol><li>Sudhof, T. C. Nature. 455 (7215), 903-903 (2008).</li>
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Neurexins e neuroligins svolgono ruoli fondamentali nella trasmissione sinaptica 11 e la differenziazione delle connessioni sinaptiche 12. Entrambe le molecole sono stati identificati come geni candidati per l&#39;autismo 13,14. In questo video vi mostriamo un metodo semplice che ci permette di studiare l&#39;effetto di geni che influenzano la risposta osmotica evitare in C. elegans. Neuroligin mutanti carenti sono difettosi nel rilevare la forza osm...

Tabella 1. C. elegans ceppi. <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> Tensione </td><td> Gene </td><td> Allele </td><td> Fonte </td></tr><tr><td> Bristol N2 </td><td> - </td><td> - </td><td> aCGC </td></tr><tr><td> VC228 </td><td> NLG-1 </td><td> ok259 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> FX00474 </td><td> NLG-1 </td><td> tm474 </td><td> bNBP-GIAPPONE </td></tr><tr><td> VC1416 </td><td> NRX-1 </td><td> ok1649 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> FX1961 </td><td> NRX-1 </td><td> tm1961 </td><td> NBP-GIAPPONE </td></tr><tr><td> NL2099 </td><td> RRF-3 </td><td> pk1436 </td><td> CGC </td></tr><tr><td> CRR21 </td><td> NRX-1; NLG-1 </td><td> ok1649; ok259 </td><td> Questo lavoro </td></tr><tr><td> CRR22 </td><td> NRX-1; NLG-1 </td><td> tm1961; ok259 </td><td> Questo lavoro </td></tr></tbody></table> a. Caenorhabditis Genetic Center, Università del Minnesota, USA. b. Progetto nazionale per la Bioresource sperimentale degli animali &quot;nematode C. elegans&quot;. Tokyo donna Medical University, in Giappone.

evitare osmotica caenorhabditis elegans: funzione sinaptica di due geni, ortologhi di human nrxn1 e nlgn1, come candidati per l&#39;autismo

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Neurexins e neuroligins sono molecole di adesione delle cellule presenti nelle sinapsi eccitatorie e inibitorie, e sono tenuti per un corretto funzionamento della rete neuronale 1. Queste proteine ​​si trovano al membrane presinaptico e postsinaptico 2. Studi condotti su topi indicano che neurexins e neurologins hanno un ruolo essenziale nella trasmissione sinaptica 1. Recenti studi hanno dimostrato che le connessioni neuronali alterate nel corso dello sviluppo del sistema nervoso umano potrebbe costituire la base della eziologia di numerosi casi di disturbi dello spettro autistico 3. Caenorhabditis elegans potrebbe essere utilizzato come uno strumento sperimentale per facilitare lo studio del funzionamento dei componenti sinaptica, per la sua semplicità per la sperimentazione di laboratorio, e dato che il suo sistema nervoso e il cablaggio sinaptica è stato pienamente caratterizzato. In C. Elegans NRX-1 e NLG-1 geni ortologhi di uomo e NRXN1 NLGN1 geni che codificano neurexin-alfa-1-1 e neuroligin proteine, rispettivamente. Negli esseri umani e nematodi, l&#39;organizzazione di neurexins e neuroligins è simile rispetto a domini funzionali. Il capo del nematode contiene il amphid, un organo sensoriale del nematode, che media le risposte a stimoli diversi, tra cui la forza osmotica. Il amphid è composto da 12 neuroni bipolari con dendriti sensoriali ciliate e un assone terminale presinaptico 4. Due di questi neuroni, chiamato ASHR e ASHL sono particolarmente importanti in osmotica funzione sensoriale, rilevando idrosolubili repellenti con elevata resistenza osmotica 5. I dendriti di queste due neuroni allungare fino alla punta della bocca e gli assoni estendere all&#39;anello nervose, dove effettuare i collegamenti sinaptici con altri neuroni determinare la risposta comportamentale 6. Per valutare le implicazioni di neurexin e neuroligin in alto evitamento forza osmotica, ci mostrano la diversa risposta di C. elegans mutanti difettosi in NRX-1 e NLG-1 geni, usando un metodo basato su un anello di fruttosio 4M 7. I fenotipi comportamentali sono stati confermati utilizzando specifici cloni RNAi 8. In C. elegans, il dsRNA necessaria per attivare RNAi può essere somministrato per alimentazione 9. La consegna dei dsRNA attraverso il cibo induce l&#39;interferenza di RNAi del gene di interesse permettendo così l&#39;identificazione di componenti genetiche e percorsi di rete.

Neurexins e neuroligins sono membrane dei neuroni proteine ​​di adesione che svolgono ruoli essenziali nella differenziazione e la trasmissione sinaptica. Neuroligin mutanti carenti di<em&gt; C. elegans</em&gt; Sono difettosi nel rilevare la forza osmotica, ma quando contengono anche una mutazione nel gene che codifica neurexin, si riprendono il fenotipo wild type.

Evitare osmotica Caenorhabditis elegans: Funzione sinaptica di due geni, ortologhi di Human NRXN1 E NLGN1, Come candidati per l&#39;autismo

Le neurexine e le neuroligine sono molecole di adesione cellulare presenti nelle sinapsi eccitatorie e inibitorie, ed esse sono necessarie per il corretto funzionamento della rete neuronale1. Queste proteine si trovano nelle membrane presinaptiche e postsinaptiche 2. Studi su modelli murini indicano che le neurexine e le neuroligine svolgono un ruolo essenziale nella trasmissione sinaptica 1. Rapporti recenti hanno dimostrato che alterazioni nelle connessioni neuronali durante lo sviluppo del sistema nervoso umano potrebbero costituire la base dell'eziologia di numerosi casi di disturbi dello spettro autistico 3. Caenorhabditis elegans potrebbe essere utilizzato come strumento sperimentale per facilitare lo studio del funzionamento dei componenti sinaptici, grazie alla sua semplicità per la sperimentazione di laboratorio e al fatto che il suo sistema nervoso e il suo cablaggio sinaptico siano stati completamente caratterizzati. In C. elegans, i geni nrx-1 e nlg-1 sono ortologhi ai geni umani NRXN1 e NLGN1, che codificano rispettivamente per le proteine alfa-neurexina-1 e neuroligina-1. Negli esseri umani e nei nematodi, l'organizzazione di neurexine e neuroligine è simile per quanto riguarda i domini funzionali. La testa del nematode contiene l'anfide, un organo sensoriale del nematode che media le risposte a diversi stimoli, inclusa la forza osmotica. L'anfide è composto da 12 neuroni bipolari sensoriali con dendriti ciliati e un singolo assone con terminale presinaptico 4. Due di questi neuroni, denominati ASHR e ASHL, sono particolarmente importanti per la funzione sensoriale osmotica, in quanto rilevano repellenti idrosolubili ad alta forza osmotica 5. I dendriti di questi due neuroni si allungano fino all'estremità della bocca e gli assoni si estendono fino all'anello nervoso, dove stabiliscono connessioni sinaptiche con altri neuroni che determinano la risposta comportamentale 6. Per valutare l'implicazione di neurexina e neuroligina nell'evitamento di un'alta forza osmotica, mostriamo la differente risposta di mutanti di C. elegans difettosi nei geni nrx-1 e nlg-1, utilizzando un metodo basato su un anello di fruttosio 4M 7. I fenotipi comportamentali sono stati confermati utilizzando cloni specifici di RNAi 8. In C. elegans, il dsRNA necessario per innescare l'RNAi può essere somministrato per via alimentare 9. La somministrazione di dsRNA attraverso il cibo induce l'interferenza RNAi del gene di interesse, consentendo così l'identificazione dei componenti genetici e delle vie di rete.

Salve, mi chiamo Manuel Ruiz Rubio, sono presso il Dipartimento di Genetica dell'Università di Cordova in Spagna. Stiamo utilizzando Caenorhabditis elegans come strumento sperimentale nello studio dell'autismo, sfruttando il sistema nervoso completamente caratterizzato di questo organismo. Stiamo analizzando mutanti del nematode privi di geni coinvolti nella sinapsi neurale e associati all'autismo.Le neuregine sono molecole di adesione della membrana presenti nella sinapsi. La testa di C. elegans contiene l'amfide, un organo sensoriale del nematode che media le risposte a diversi stimoli, inclusa la forza osmotica. L'amfide è composto da 12 neuroni sensoriali bipolari con dendriti ciliati e un assone terminale presinaptico.Due di questi neuroni, chiamati ASHR e ASHL, sono particolarmente importanti nella funzione sensoriale osmotica, poiché rilevano repellenti solubili in acqua con elevata forza osmotica. Ecco un metodo basato su un anello di fruttosio 4M per misurare l'evitamento osmotico in mutanti del C. elegans con difetti sinaptici.Per valutare le implicazioni di neurexina e neuroligina nell'evitamento di elevata forza osmotica, riportiamo la risposta differenziale di C. elegans a mutanti difettosi nei geni nrx-1 e nlg-1, utilizzando un metodo basato su una soluzione di fruttosio 4 M. Nel giorno dell'esperimento, preparare una soluzione madre di fruttosio 4 M con l'1% di rosso Congo, sciogliendo completamente a temperatura ambiente. Tracciare un anello di un centimetro di diametro sull'agar NGM, posizionandolo al centro del mezzo solido.Utilizzando 15 microlitri della soluzione rossa di fruttosio quattro molare. Lasciare assorbire il fruttosio nell'area circostante per circa cinque minuti. L'esperimento deve essere eseguito in cieco. La piastra con ciascun ceppo da testare deve essere etichettata da un secondo sperimentatore.L'SA viene eseguita utilizzando questi marcatori che vengono forniti spontaneamente. Quando l'esperimento è terminato, circa 24 ore prima dell'esecuzione della prova, è necessario selezionare quattro larve per ogni genotipo e trasferirle su una piastra AFL NGM contenente batteri e coli, mantenendole a 20 gradi Celsius fino al giorno successivo. L'esperimento deve essere avviato con adulti giovani.Posizionare un singolo verme di ciascun ceppo all'interno del cerchio di riposo e seguire ogni animale per registrare il tempo di risposta alla barriera con il tic. Per ottenere un risultato conclusivo, devono essere testati 10 animali per ogni ceppo e devono essere eseguiti almeno tre esperimenti replicati. Gli individui che evitano l'anello rosso per sei volte consecutive vengono classificati come normali.I soggetti che escono dall'anello in meno di sei tentativi sono considerati difettosi nel controllo della sensibilità all'osmosi; deve essere utilizzata una ceppa di controllo SA Bristol e due animali vengono impiegati come controlli positivi poiché evitano l'ostacolo costituito dall'anello. I ceppi di controllo rispondono arretrando quando incontrano una barriera osmotica costituita da fruttosio 4 M. I mutanti carenti di neurodifine mostrano un comportamento simile a questi rispetto alla forza del tipo uno.Tuttavia, i mutanti carenti di NEUR non sono riusciti a rilevare questa barriera osmotica. I doppio mutanti per diversi alleli di neur e nout hanno recuperato il fenotipo selvatico, rispondendo alla forza osmotica per ottenere vermi Of down mediante alimentazione con interferenza dell'RNA. Isolare colonie del ceppo di E. coli HD11.5 che è stato trasformato con il vettore L4440 contenente un frammento corrispondente al gene bersaglio. Il giorno successivo, isolare i batteri su piastra LBA o con carbonico.Prelevare una colonia di batteri e inoculare il mezzo liquido LV. Far crescere per circa sette ore con agitazione a 37 gradi. Vedere la goccia di questa coltura su una piastra NGM con tetto di carbonato e IPTG e lasciare in incubazione tutta la notte a temperatura ambiente, permettendo ai batteri di crescere e avviando l'induzione dell'espressione del frammento del gene bersaglio.È necessario utilizzare un controllo positivo e un controllo non negativo per l'interferenza dell'RNA. Esperimenti di alimentazione. Il controllo negativo è uguale.Stirpe I HT 11 cinque trasformata con il vettore TL 44 40. I controlli positivi sono cellule ELI HT 11 cinque trasformate con il vettore L 44 40 contenente una sequenza del gene 22. L'inattivazione di questo gene origina un fenotipo di tremolio facilmente distinguibile al microscopio sterile.Primo giorno. Quattro larve di stadio L1 provenienti da piastre NGM con batteri vengono trasferite su una piastra contenente batteri e Kuwait a 20 gradi Celsius per 12 ore. Questo è un periodo di digiuno.Il giorno successivo, trasferire il giovane adulto veloce su una piastra inoculata con batteri che esprimono il gene bersaglio specifico dell'interferenza dell'RNA. Lasciare per circa 48 ore a 20 gradi Celsius per ottenere la progenie F1. Successivamente, selezionare alcuni adulti F1 bomba su un'altra piastra inoculata con gli stessi batteri nei due giorni successivi.Selezionare e isolare giovani adulti dalla progenie F2, valutando i fenotipi del ceppo selvatico Bristol N2 grasso con batteri che presentano empatia. Il vettore L 44 40 stava andando all'indietro quando era fine. La barriera osmotica.Il ceppo di tipo selvatico Bristol And true white alimentato con batteri che esprimono un frammento del gene neur da elegance non è riuscito a rilevare le soluzioni molariche di tossine. Tuttavia, il mutante carente di neur, incapace di rilevare la barriera osmotica, ha recuperato questa capacità quando è stato alimentato con batteri che esprimono un frammento del gene nane da sea elegance. In questo video, mostriamo un metodo semplice che permette di studiare l'effetto dei geni che influenzano la risposta di evitamento osmotico in sea elegance.Un anello di fruttosio formalizzato con Rosso Congo viene utilizzato per analizzare la risposta del verme alla forza osmotica. I mutanti carenti di neuroligina sono difettosi in questa risposta, tuttavia i mutanti NU non risultano compromessi nel rilevare lo stress osmotico, mostrando una risposta simile a quella della ceppa selvatica. Questo video mostra che ceppi mutanti doppi portatori di diversi alleli knockout in geni coinvolti nella formazione e nel rilascio sinaptico recuperano il fenotipo selvatico rispondendo alla forza osmotica.Queste osservazioni sono state confermate utilizzando l'interferenza dell'RNA, con un approccio di blocco alimentare. In questo modo, la linea selvatica è risultata compromessa nel riconoscimento della barriera osmotica quando è stata nutrita con batteri che esprimevano la sequenza corrispondente del gene ING. D'altro canto, i mutanti difettivi in neur, che non sono in grado di rilevare la soluzione di fruttosio più concentrata, hanno recuperato questo comportamento quando sono stati nutriti con batteri che esprimevano la sequenza corrispondente del gene NNU.I risultati mostrati in questo esperimento indicano che nrx-1 e nlg-1 potrebbero essere coinvolti nella connessione sinaptica dei neuroni sensoriali del nematode e anche che interagiscono l'uno con l'altro in un modo che influisce sulla funzione sinaptica. Ok, arrivederci e buona fortuna con i vostri esperimenti.

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I modelli di roditori sono strumenti preziosi per studiare i comportamenti fondamentali legati al disturbo dello spettro autistico (ASD). In questo articolo, esponiamo due test comportamentali per modellare le caratteristiche principali dell'ASD nei topi: l'auto-toelettatura, che valuta il comportamento ripetitivo, e il test di interazione sociale a tre camere, che documenta le menomazioni sociali.

Strategie per valutare i comportamenti simil-autistici nei topi

L'elettrofisiologia dinamica del clamp può stabilire collegamenti causali tra i deficit di attivazione neuronale e la disfunzione dei canali ionici. Descriviamo i metodi e i protocolli di clamp dinamico nei neuroni cerebellari di Purkinje di topo, rilevando risorse utili e considerazioni tecniche. In uno studio rappresentativo, abbiamo aggiunto la conduttanza del sodio modellata ai neuroni Tsc1-/- di Purkinje per evitare l'attivazione ripetitiva.

Metodi di clamp dinamico per studiare l'eccitabilità neuronale compromessa associata all'autismo

Questo protocollo valuta l'attività sinaptica funzionale tra partner neuronali definiti in vivo nel sistema nervoso centrale delle larve di Drosophila melanogaster utilizzando strumenti codificati geneticamente. CsLa stimolazione optogenetica mediata da Chrimson dei neuroni sensoriali presinaptici cIVda induce la fotoconversione dipendente dal calcio di CaMPARI negli interneuroni postsinaptici del Bacino-4.

Caratterizzazione funzionale dei partner individuali pre- e postsinaptici nel sistema nervoso centrale larvale di Drosophila utilizzando CaMPARI

Scopri la funzione sinaptica di neurexine e neuroligine in Caenorhabditis elegans per studiare i meccanismi sensoriali legati all'autismo. Questo metodo rivela interazioni genetiche cruciali nel sistema nervoso.

Evitare osmotica Caenorhabditis elegans: Funzione sinaptica di due geni, ortologhi di Human NRXN1 E NLGN1, Come candidati per lautismo (Video) | JoVE Journal

Evitare osmotica Caenorhabditis elegans: Funzione sinaptica di due geni, ortologhi di Human NRXN1 E NLGN1, Come candidati per l'autismo

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