Quantificazione del carico di Helicobacter pylori nello stomaco di un topo infetto

Per quantificare la colonizzazione da Helicobacter pylori nello stomaco di un topo infetto, iniziare con il tessuto gastrico appiattito contenente il corpo e le regioni dell'antro, sospeso in mezzi nutritivi per supportare la vitalità batterica.

Omogeneizzare per scomporre il tessuto gastrico con lo strato di muco, rilasciando l'Helicobacter pylori dal tessuto in un terreno. Eseguire diluizioni seriali dell'omogenato gastrico risultante utilizzando il terreno.

Ottenere agar di sangue di cavallo essiccato, HBA, piastre, divise in più segmenti. Le piastre HBA sono integrate con una miscela di antibiotici. Trasferire ogni diluizione di omogeneizzato su segmenti separati della piastra e distribuirla uniformemente.

Dopo l'essiccazione, posizionare le piastre in posizione capovolta all'interno di un barattolo di coltura anaerobica umidificato con miscele di gas specializzate. Incubare.

L'ambiente microaerofilo fornito dal barattolo di coltura anaerobica in combinazione con i nutrienti HBA facilita la crescita e la formazione di colonie da parte dell'Helicobacter pylori. Gli antibiotici nell'HBA inibiscono la crescita delle specie batteriche dal microbiota gastrico endogeno.

Contare le colonie di Helicobacter pylori su segmenti di piastra HBA che rientrano in un intervallo numerabile specifico.

Calcolare il carico di Helicobacter pylori nel tessuto gastrico, indicando l'entità della colonizzazione batterica all'interno del tessuto.

Per contare il numero di H. pylori vitali nello stomaco dopo l'infezione, omogeneizzare i campioni di stomaco conservati in BHI ed eseguire diluizioni seriali duplicate degli omogeneizzati gastrici risultanti in brodo fresco sterile.

Dividere l'agar di sangue di cavallo pre-essiccato, o piastre HBA, integrate con antibiotici aggiuntivi in tre o quattro segmenti e, utilizzando un adattamento della tecnica di Miles e Misra, aggiungere da 10 a 100 microlitri di ciascuna diluizione di omogeneizzato di stomaco su un segmento di ciascuna piastra di agar. Stendere gli omogeneizzati con anse di plastica sterili e lasciare asciugare le piastre. Quindi, posizionare le piastre in posizione capovolta in barattoli di gas anaerobici contenenti una capsula di Petri d'acqua e un impacco di gas, quindi incubare i barattoli a 37 gradi Celsius per quattro-sette giorni.

Quando le colonie possono essere osservate, enumerare i segmenti contenenti tra 10 e 100 colonie isolate.