Un test battericida sierico per l'attività battericida mediata dal complemento degli anticorpi
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:40 min. • July 8th, 2025
Prelevare un campione di siero diluito in serie contenente anticorpi monoclonali contro i lipopolisaccaridi, o LPS, un componente della membrana esterna dei batteri gram-negativi.
Introdurre batteri gram-negativi. Gli anticorpi sierici si legano all'LPS batterico.
Aggiungi le proteine del complemento. Il complesso C1 si lega agli anticorpi legati all'LPS, formando un C1 enzimaticamente attivo.
Il C1 attivato scinde C4 e C2 per formare C3 convertasi, che scinde C3 per formare C5 convertasi. La convertasi scinde C5 per produrre C5b, che recluta C6 e C7. Il complesso risultante si inserisce nella membrana esterna e si associa con C8 e C9 multipli, formando un poro.
Il danno alla membrana esterna destabilizza la membrana interna, causando la lisi cellulare.
Posizionare il composto su una piastra di agar e stenderlo. Incubare per la crescita batterica. Rivestire la piastra con agar contenente cloruro di trifenile tetrazolio, o TTC, che viene ridotto dalle deidrogenasi microbiche, conferendo un colore rosso alle colonie batteriche.
Il numero di colonie aumenta con la diluizione del campione, indicando una ridotta attività battericida con una minore concentrazione di anticorpi.
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