Valutazione della citotossicità e dell'integrità della membrana in fette polmonari tramite il saggio della lattato deidrogenasi
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:58 min. • July 8th, 2025
Inizia con fette di polmone umano tagliate con precisione, PCLS, trattate con agenti citotossici come molecole di tensioattivo in una piastra multipozzetto.
Il tensioattivo si inserisce nel doppio strato lipidico della cellula, facendo interagire le code idrofobiche del tensioattivo con il nucleo idrofobico del doppio strato lipidico.
Di conseguenza, la disposizione ordinata delle molecole lipidiche viene disturbata, portando alla formazione di una micella.
Ciò compromette l'integrità della membrana, causando la fuoriuscita di contenuti intracellulari tra cui la lattato deidrogenasi o LDH, un indicatore comune di danno alla membrana cellulare.
Raccogli il surnatante contenente l'LDH rilasciato.
Aggiungere il cocktail di reazione del saggio LDH contenente substrato di lattato, NAD+, diaforasi e sale di tetrazolio e incubare.
LDH ossida il lattato a piruvato, con contemporanea riduzione del coenzima NAD+ a NADH.
La diaforasi utilizza il NADH per ridurre il sale del tetrazolio in formazan, un prodotto colorato.
La citotossicità indotta da tensioattivi può essere misurata dall'attività di LDH indicata dalla produzione di formazano.
Dopo aver incubato il PCLS con o senza agenti di test,
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