Valutazione dell'efficacia di un composto di test antivirale attraverso un test di inattivazione virale
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:41 min. • July 8th, 2025
Assumere provette con un virus dell'epatite C ricombinante o una sospensione di HCV contenente RNA che codifica per un reporter di luciferasi secreta.
Aggiungere un composto per il test antivirale e un solvente alle provette per il test e al controllo negativo.
I composti in esame si legano alle glicoproteine dell'HCV, inattivando il virus.
Dopo l'incubazione, diluire le miscele per evitare interazioni composto-cellula nelle fasi successive.
Aggiungere queste miscele diluite su monostrati di epatoma che supportano la replicazione dell'HCV. Incubare.
L'HCV inattivato dal composto non può legarsi a specifici recettori della superficie cellulare, mentre le glicoproteine attive dell'HCV si legano a questi recettori, facilitando l'adesione cellulare.
Rimuovere gli HCV non adsorbiti. Lavare con tampone e aggiungere il terreno. Incubare per un periodo prolungato.
L'HCV legato viene internalizzato, rilasciando RNA virale e portando alla sintesi di proteine virali e luciferasi, secrete dalla cellula.
Raccogli i surnatanti della coltura contenenti luciferasi. Centrifugare e aggiungere un substrato di luciferasi ai surnatanti.
La luciferasi ossida il substrato, emettendo luce.
Una luminescenz
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici