Generazione e mantenimento di astrosfere utilizzando cellule staminali pluripotenti umane
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:07 min. • July 8th, 2025
Inizia con una piastra rivestita di ECM e seme cluster di cellule staminali pluripotenti umane in un terreno di crescita contenente inibitori della Rho-chinasi.
La ECM migliora l'attaccamento cellulare, mentre gli inibitori bloccano le Rho-chinasi, prevenendo la morte cellulare apoptotica e promuovendo la sopravvivenza e la proliferazione cellulare.
Introdurre un mezzo di differenziazione neurale per indurre la differenziazione delle cellule staminali in cellule progenitrici neurali.
Trattare con una soluzione di distacco; gli enzimi in questa soluzione degradano la ECM e il contatto cellulare, rilasciando le cellule.
Trasferirli in un pallone non rivestito contenente inibitori della Rho-chinasi.
Gli inibitori facilitano la sopravvivenza cellulare e l'aggregazione spontanea in strutture tridimensionali o sferoidi.
Integrare gli sferoidi con un mezzo di differenziazione neurale ricco di fattori di crescita, che consente alle cellule progenitrici neurali di differenziarsi in progenitori astrocitari e formare astrosfere.
Regolarmente, aggiungere una soluzione di distacco per dissociare le astrosfere in ammassi più piccoli. Ciò consente ai nutrienti di raggiungere le cellule interne de
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