Differenziazione delle cellule staminali pluripotenti umane nei neuroni utilizzando lentivirus ingegnerizzati

Trattare le cellule staminali pluripotenti umane aderenti con lentivirus ingegnerizzati in un reagente di trasfezione.

Il virus trasporta geni per la resistenza agli antibiotici e il fattore di trascrizione neurogeno, controllati dagli elementi tetraciclina-responsivi e regolatori.

Il reagente di trasfezione caricato positivamente migliora la fusione virale e il rilascio del suo contenuto.

L'RNA virale si trascrive inversamente nel DNA e si integra nel DNA delle cellule staminali, consentendo l'espressione di elementi regolatori che producono proteine attivatrici.

Aggiungere un terreno basale con derivato della tetraciclina, che forma un complesso con le proteine attivatrici.

Questo complesso si lega all'elemento responsivo alla tetraciclina, promuovendo l'espressione genica e producendo i fattori di trascrizione neurogeni che inducono la differenziazione delle cellule staminali nei neuroni.

Aggiungere un terreno basale con un farmaco antibiotico per eliminare le cellule non trasfettate.

Trattare le cellule con una soluzione di distacco contenente enzimi proteolitici che degradano la matrice extracellulare o ECM e rilasciano le cellule.

Rimuovere gli enzimi e ri-placcare le cellule