Caratterizzazione degli sferoidi del tumore neuroendocrino dell'intestino tenue mediante immunofluorescenza

Prendi gli sferoidi del tumore neuroendocrino dell'intestino tenue in una provetta.

Aggiungi una soluzione fissativa per preservare le cellule.

Per lavare, centrifugare e sostituire il fissativo con il tampone.

Centrifuga e scarta il surnatante per rimuovere qualsiasi fissativo rimasto.

Aggiungi un tampone contenente un detergente e un agente bloccante per permeabilizzare le membrane cellulari e prevenire il legame di anticorpi non specifici.

Lavare con tampone per rimuovere il detersivo in eccesso e l'agente bloccante.

Incubare con anticorpi primari, che si legano alla proteina bersaglio specifica per la cellula neuroendocrina.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.

Aggiungi anticorpi secondari marcati con fluoroforo che si legano agli anticorpi primari.

Risciacqua con un tampone per rimuovere gli anticorpi in eccesso.

Aggiungi un mezzo di montaggio contenente un colorante per macchiare il nucleo.

Trasferisci gli sferoidi su un vetrino e montali con un vetrino coprioggetti.

Usa un microscopio a fluorescenza per visualizzare le cellule neuroendocrine dello sferoide che esprimono proteine specifiche.

Correggi gli organoidi aggiungendo 500 microlitri di paraformaldeide e inc