JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:14 min. • May 29th, 2025
Prendiamo una camera di imaging contenente tessuto del plesso mienterico del colon immobilizzato di topo, che ospita plessi gangliari composti da reti di neuroni enterici e cellule gliali.
Queste cellule sono marcate con un indicatore di calcio che emette fluorescenza al legame con il calcio.
Quindi, posizionare la camera su un tavolino per microscopio a fluorescenza. Perfondere la camera con un tampone preriscaldato contenente inibitori per sopprimere le contrazioni muscolari durante l'imaging.
Utilizzando un microscopio, identifica le regioni gangliari sane che mostrano una fluorescenza uniforme.
Acquisisci immagini fluorescenti per misurare l'attività basale, fornendo un riferimento per i livelli intracellulari di calcio.
Perfondere il tessuto con un agonista del recettore per attivare i recettori neuronali, che innesca l'afflusso intracellulare di calcio e un aumento dell'intensità della fluorescenza.
L'attivazione neuronale stimola indirettamente le cellule gliali circostanti, portando all'afflusso di calcio e al conseguente aumento della fluorescenza.
Acquisisci immagini fluorescenti time-lapse per misurare le variazioni dell'intensità della fluorescenza, che indicano la dinamica de
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