Imaging tridimensionale di astrociti immunomarcati mediante microscopia confocale

Prendi una sezione cerebrale di topo immunocolorata con astrociti marcati in fluorescenza. Il citoplasma dell'astrocita diventa rosso fluorescente, mentre il nucleo diventa blu.

Posizionare il vetrino sul tavolino di un microscopio confocale sotto una lente obiettiva adatta.

Utilizzando il software di acquisizione, regolare la messa a fuoco e selezionare i fluorofori che marcano il citoplasma dell'astrocita e il nucleo.

Avvia l'imaging dal vivo e ottimizza i parametri di imaging per ridurre il rumore nell'immagine acquisita.

In Parametri di acquisizione, selezionare una modalità di scansione a bassa velocità per acquisire un'immagine bidimensionale di qualità superiore.

Identifica la posizione più alta dell'astrocita come punto di partenza per lo Z-stack e la posizione più bassa come punto finale.

Definisce il numero di sezioni che coprono l'intera profondità della cella.

Unisci le fette per generare un'immagine tridimensionale dell'astrocita.

Per iniziare la microscopia confocale, posizionare un vetrino sul tavolino del microscopio e selezionare l'obiettivo 63x. Dopo aver aperto il software di acquisizione, fare clic su Smart Setup nella scheda Acquisizione e selezionare i fluorofori app