Caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali geneticamente modificate per applicazioni neuroterapeutiche

Inizia con le cellule staminali mesenchimali transgeniche di topo, cellule multipotenti derivate dal midollo osseo.

Le cellule sono ingegnerizzate per esprimere GFP e fattori neurotrofici terapeutici che supportano la crescita e la sopravvivenza neuronale.

Lavare le cellule con tampone e fissarle per preservarne l'integrità.

Lavare nuovamente con tampone, quindi aggiungere una soluzione per permeabilizzare la cellula e le membrane nucleari e bloccare i siti di legame non specifici.

Introdurre anticorpi primari che hanno come bersaglio una proteina marcatrice della proliferazione cellulare espressa esclusivamente nel nucleo delle cellule in divisione.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.

Aggiungere anticorpi secondari coniugati con fluorofori che prendono di mira gli anticorpi primari e un colorante legante il DNA per contrastare la colorazione dei nuclei.

Lavare con tampone per rimuovere i reagenti non legati.

Caricare la lastra nel sistema di screening ad alto contenuto e acquisire immagini per rilevare i segnali fluorescenti.

L'espressione del marcatore di proliferazione cellulare indica una divisione cellulare attiva, suggerendo l'idoneità delle cellule transgeniche