Misurazione quantitativa della Invadopodia-mediata proteolisi della matrice extracellulare in singoli contesti e pluricellulari

Questa tecnica standard produce vetrini coprioggetti rivestiti di gelatina con tag fluorescenti adatti per saggi di degradazione quantitativa della matrice del podio invasa. Dopo aver codificato i vetrini di copertura con gelatina marcata in fluorescenza, piastrate le cellule e la coltura per la degradazione della matrice. Successivamente, fissare e colorare in modo fluorescente le cellule per le proteine marcatrici dei podi inve, acquisire le immagini e quantificare la degradazione della matrice.

I risultati tipici possono quantificare le differenze nella degradazione della matrice mediata da ive podi tra le cellule con la manipolazione differenziale di geni selezionati o il trattamento con agenti farmacologici. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto la preparazione di vetrini coprioggetti rivestiti di gelatina con fluorescenza omogenea è difficile da ottenere a causa del rivestimento irregolare della gelatina fluorescente o della manipolazione impropria dei vetrini coprioggetti rivestiti di gelatina. A dimostrare la procedura saranno l'assistente professore di ricerca Karen Martin, l'associata post-dottorato Mandy Ammer e gli studenti laureati Elise Walk, Karen Hayes e Steve Markwell.