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JoVE Journal Biology
Sonication-facilitated Immunofluorescence Staining of Late-stage Embryonic and Larval Drosophila Tissues In Situ

Sonicazione-facilitato immunofluorescenza colorazione di ritardo-fase embrionale e larvale Drosophila Tessuti In Situ

Full Text
13,245 Views
10:10 min
August 14, 2014

DOI: 10.3791/51528-v

Ashley Fidler*1, Lauren Boulay*1, Matthew Wawersik1

1Department of Biology,College of William & Mary

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

L'immunocolorazione è una tecnica efficace per visualizzare specifici tipi di cellule e proteine all'interno dei tessuti. Utilizzando la sonicazione, il protocollo qui descritto allevia la necessità di sezionare i tessuti di Drosophila melanogaster da embrioni e larve in fase avanzata prima dell'immunocolorazione. Forniamo una metodologia efficiente per l'immunocolorazione di larve intere di montatura fissate con formaldeide.

L'obiettivo generale di questa procedura è visualizzare o saziare i tessuti in C 2 utilizzando la microscopia a fluorescenza dopo la sonicazione. Ciò si ottiene raccogliendo prima campioni embrionali e larvali e poi fissandoli utilizzando formaldeide, eptano e metanolo. Il secondo passo consiste nel sonicare il campione fissato per rimuovere la cuticola per consentire la penetrazione degli anticorpi.

Successivamente, il campione viene colorato immuno con anticorpi primari e secondari fluorescenti. Il passaggio finale consiste nel montare il campione in una soluzione Antifa a base di glicerolo. In definitiva, la microscopia confocale o epifluorescente viene utilizzata per visualizzare il tessuto in via di sviluppo, nonché l'espressione e la localizzazione delle proteine.

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Biologia Molecolare Issue 90 Drosophila Embrioni larve sonicazione fissazione immunostain immunofluorescenza organogenesi lo sviluppo

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