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DOI: 10.3791/51528-v
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L'immunocolorazione è una tecnica efficace per visualizzare specifici tipi di cellule e proteine all'interno dei tessuti. Utilizzando la sonicazione, il protocollo qui descritto allevia la necessità di sezionare i tessuti di Drosophila melanogaster da embrioni e larve in fase avanzata prima dell'immunocolorazione. Forniamo una metodologia efficiente per l'immunocolorazione di larve intere di montatura fissate con formaldeide.
L'obiettivo generale di questa procedura è visualizzare o saziare i tessuti in C 2 utilizzando la microscopia a fluorescenza dopo la sonicazione. Ciò si ottiene raccogliendo prima campioni embrionali e larvali e poi fissandoli utilizzando formaldeide, eptano e metanolo. Il secondo passo consiste nel sonicare il campione fissato per rimuovere la cuticola per consentire la penetrazione degli anticorpi.
Successivamente, il campione viene colorato immuno con anticorpi primari e secondari fluorescenti. Il passaggio finale consiste nel montare il campione in una soluzione Antifa a base di glicerolo. In definitiva, la microscopia confocale o epifluorescente viene utilizzata per visualizzare il tessuto in via di sviluppo, nonché l'espressione e la localizzazione delle proteine.
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