Alta Tecnica Throughput fluorometrica per la valutazione dei macrofagi fagocitosi e polimerizzazione

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quantificare i cambiamenti nel processo fagocitario o agire nella polimerizzazione in seguito all'aggiunta di agonisti o antagonisti. Ciò si ottiene aggiungendo particelle marcate in fluorescenza alle cellule fagocitiche e lasciando un tempo sufficiente per la fagocitosi. Come secondo passo per fermare la fagocitosi, le cellule vengono trattate con triam blue per estinguere la fluorescenza delle particelle non internalizzate, lavate e successivamente fissate con paraldeide.

Il passo successivo è la colorazione e la quantificazione. Al fine di facilitare la rilevazione fluorescente di cellule e particelle, cellule sostenute con DPI o actina, i risultati mostrano l'effetto del trattamento sulla fagocitosi e sulla polimerizzazione dell'actina quantificato attraverso un rapporto tra fluorescenza verde rosso e blu basato sull'analisi fluorimetrica. Il vantaggio principale della tecnica fluorometrica rispetto ai metodi esistenti è che si tratta di un metodo economico ad alto rendimento per la valutazione della fagocitosi.