Name: Tecniche di lavorazione occhi impiantati con una retina Protesi per Localized istopatologico Analysis: Part 2 epiretinica impianti con retina aderenze (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Impara tecniche istologiche per valutare la salute oculare adiacente a protesi retiniche epiretinali con componenti metalliche. Questo metodo consente la visualizzazione in situ dell'interfaccia tessuto-impianto.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nicole Vella (Macquarie University) per aver fornito i reagenti; Alexia Saunder (Istituto di Bionica; BI), Michelle McPhedran (BI), Chris Williams (BI) per il supporto sperimentale; il personale del Royal Victorian Eye and Ear Hospital (RVEEH) Biological Research Centre per la cura degli animali; Sue Pierce (RVEEH) per la consulenza veterinaria; Anthony Burkitt (Bionic Vision Australia; BVA), Tamara Brawn (BVA) e lo staff BVA per il supporto amministrativo. 
Questa ricerca è stata supportata dall'Australian Research Council (ARC) attraverso la sua Special Research Initiative (SRI) in Bionic Vision Science and Technology grant a Bionic Vision Australia (BVA). Il Bionics Institute riceve il supporto per l'infrastruttura operativa dal governo del Victoria e riconosce anche il sostegno del Bertalli Family Trust e del J T Reid Charitable Trust. I finanziatori non hanno avuto alcun ruolo nella progettazione dello studio, nella raccolta e nell'analisi dei dati, nella decisione di pubblicare o nella preparazione del manoscritto.
Gli autori dei consorzi Bionic Vision Australia per questo manoscritto sono (a-z): 
Penelope J. Allen, Owen Burns, Kate E. Fox, Kumaravelu Ganesan, David J. Garret, Hamish Meffin, Joel Villalobos e Jonathan Yeoh.

NOTA: Tutte le procedure sono state approvate dal Royal Victorian Eye and Ear Research &amp; Ethics Comitato Animal Hospital (RVEEH AEC; # 10-199AB). I soggetti sono stati trattati secondo il National Health e &quot;Codice di condotta australiano per la cura e l&#39;uso di animali a scopi scientifici&quot; del Medical Research Council (2013) e la &quot;Prevenzione della Crudeltà verso gli Animali Act&quot; (1986; e modifiche). Tutte le procedure di valutazione e di elettrofisiologia chirurgiche, cliniche sono state effettuate sotto anestesia e sono stati fatti tutti gli sforzi per ridurre al minimo le sofferenze. 1. enucleazione e Fixation NOTA: Seguire la procedura enucleazione e la fissazione descritto in dettaglio nel manoscritto compagno di 16, facendo attenzione in più verso cavi di dispositivi o porte vitrectomia, se presente. Brevemente, ciò comporta: <ol><li> Transcardiaca profumato il soggetto con soluzione salina calda seguita da buffe neutra a freddoformalina rosso. </li><li> Legare suture al bulbo oculare per servire come punti di riferimento. </li><li> Enucleare l&#39;occhio 16, mantenendo i cavi del dispositivo e qualsiasi attacco patch / schede. </li><li> Post-fix l&#39;occhio in soluzione di Davidson per 18 - 36 ore. </li><li> Trasferimento al 50% di etanolo per 6 - 8 ore. </li><li> Trasferimento a 70% di etanolo e conservare in frigorifero (4 ° C) fino dissezione. </li></ol> 2. Rimozione elettrodi e dissezione. NOTA: Non tutti gli impianti epiretiniche avranno lo stesso fattore di forma, ma in generale ci sarà un array di elettrodi e una qualche forma di materiale di supporto flessibile e adattabile. I dispositivi che sono collocati assieme alla retina presentano un foro in cui il tack tack metallo penetra la matrice e la parte posteriore dell&#39;occhio, mantenendo queste insieme. <ol><li> Visualizzate l&#39;impianto e il punto in cui è fissato alla retina. <ol><li> Utilizzando una lama di 15 gradi fa un&#39;incisione trans-corneale circonferenziale e togliere il tappo corneale a expose l&#39;iride e lente sottostanti. </li><li> Utilizzando una lama 15 gradi, il disinserimento fibre zonular della lente e rimuovere la lente in toto, esponendo camera posteriore con l&#39;impianto e il epiretinal tack metallo in situ. </li></ol></li><li> A seconda dell&#39;impianto e lo studio in corso di esecuzione, rimuovere i componenti estranei prima di ulteriori dissezione. NOTA: Nel presente esempio, l&#39;array epiretinal corso di valutazione costituito da un elettrodo di diamante ermetica pacchetto ed elettronica prototipo ospitato all&#39;interno di un vettore di silicone conforme (prodotto in casa, vedi 20). <ol><li> Qui, estrarre con cautela il pacchetto elettrodo diamante da dissezione fine con un bisturi. Lasciare il corpo silicone dell&#39;impianto insieme al tack retina e resti del cablaggio di platino (Figura 2). Se un array / contenitore incorporato non è parte del design del dispositivo in esame, quindi omettere questo passaggio (2.2). </li></ol></li><li> Attentamentesezionare un campione che comprende l&#39;aderenza e tessuto circostante nell&#39;orientamento desiderato. Usare bene le forbici dissezione per tagliare le strisce di spessore pieno dalla parte posteriore dell&#39;occhio, tra cui sclera, coroide e della retina. Prelevare un campione, che dà una sezione longitudinale del tack, che mostra tutti gli strati retinici adiacenti alla tack (Figura 2) NOTA: L&#39;orientamento desiderato per il campione può variare a seconda del particolare risultato desiderato. Ad esempio, se si vuole esaminare la vicinanza del danno virata al disco ottico poi il disco ottico deve essere inclusa nel campione. </li></ol> 3. Disidratazione, Embedding, montaggio, Macinare, colorazione, e Imaging <ol><li> Disidratare il campione in tre giorni in fasi progressive di etanolo: <ol><li> Disidratare il campione in etanolo al 70% per 2 ore due volte. </li><li> Disidratare il campione in 80% di etanolo per 2 ore due volte e poi O / N. </li><li> Disidratare il campione in etanolo al 90% per 2 ore TWICe. </li><li> Disidratare il campione in 100% di etanolo per 2 ore due volte e poi O / N. </li></ol></li><li> Disidratare il campione in 100% acetone per 2 ore due volte. <ol><li> Togliere il campione dal acetone e osservare al microscopio luce che aria-asciuga a temperatura ambiente. Trasferire il campione di resina epossidica (fare riferimento al punto 3.4) poco prima che inizi ad arricciarsi / crollo. NOTA: La rimozione del liquido dai tessuti molli risultati in cellule crollati e ritiro. Un apprezzamento di quando si verifica l&#39;arricciatura del tessuto / crollo è sviluppato con l&#39;esperienza. </li></ol></li><li> Preparare resina epossidica grado medico secondo le istruzioni del produttore. Per curare la resina, utilizzare 55 ° C per 1 ora o 24 ore a RT. Porre in una camera a vuoto per ~ 5 min a ~ 50 mbar per la rimozione di bolle d&#39;aria. Regolare il vuoto manualmente come un vuoto eccessivo causerà la miscela epossidica a bollire e degasaggio non si verifichi effettivamente NOTA: Eseguire il passaggio 3.3 in concomitanza con la fase 3.2. </li><li> Incorpora la sample in resina epossidica trasparente. Immergere il tessuto oculare in resina epossidica degasata in un apposito contenitore sigillabile e lasciare O / N a RT per curare. </li><li> Fare attenzione a incorporare il campione con l&#39;orientamento desiderato (Figura 2) ridimensionando e ri-embedding blocco resina catalizzata. Re-incorporare il blocco ridimensionata contenente il tessuto oculare tale che l&#39;asse lungo della mura è orientato parallelamente al fondo dello stampo (giallo tazza - Figura 3A). </li><li> Montare la resina in supporto del campione di macinazione e macinare il campione (230-250 giri con acqua, rettifica manuale) con carta carburo di silicio (a partire da 800 rete; Figure 3C e 3E). </li><li> Per la colorazione, immergere la superficie del terreno in toluidina colorazione blu per 3-5 minuti, o fino a quando si sviluppa macchia (Figura 3F). </li><li> Risciacquare con acqua di rubinetto (Figura 3G). </li><li> Immagine la superficie del terreno del campione con una portata elevata potenza dissezione per visualizzare gli strati cellulari delretina (Figura 3H). Applicare una goccia di acqua distillata sulla superficie superiore della resina epossidica sopra il campione per lisciare la diffrazione all&#39;interfaccia aria-epossi. Utilizzare una fibra &#39;collo d&#39;oca&#39; sorgente luminosa ottica per illuminare il campione. </li><li> Ripetere i passaggi 3,6-3,9, ogni tempo di macinazione di distanza uno spessore prefissato di campione (minimo incremento molatura preciso e riproducibile di portacampioni è 20 micron). </li></ol>

<ol><li>Shepherd, R. K., Shivdasani, M. N., Nayagam, D. A., Williams, C. E., Blamey, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+prostheses+for+the+blind%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Visual prostheses for the blind.</a> Trends Biotechnol. 31, 562-571 (2013).</li>
<li>Santos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+the+inner+retina+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Preservation of the inner retina in retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 115, 511-515 (1997).</li>
<li>Humayun, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+perception+in+a+blind+subject+with+a+chronic+microelectronic+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Visual perception in a blind subject with a chronic microelectronic retinal prosthesis.</a> Vision Res. 43, 2573-2581 (2003).</li>
<li>Roessler, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiographic+findings+folowing+tack+fixation+of+a+wireless+epiretinal+retina+implant+device+in+blind+RP+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Angiographic findings folowing tack fixation of a wireless epiretinal retina implant device in blind RP patients.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 249, 1281-1286 (2011).</li>
<li>Chow, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+artificial+silicon+retina+microchip+for+the+treatment+of+vision+loss+from+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The artificial silicon retina microchip for the treatment of vision loss from retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 122, 460-469 (2004).</li>
<li>Zrenner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+electronic+chips+allow+blind+patients+to+read+letters+and+combine+them+to+words%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Subretinal electronic chips allow blind patients to read letters and combine them to words.</a> Proc Biol Sci. 278, 1489-1497 (2011).</li>
<li>Fujikado, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+of+semichronically+implanted+retinal+prosthesis+by+suprachoroidal-transretinal+stimulation+in+patients+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Testing of semichronically implanted retinal prosthesis by suprachoroidal-transretinal stimulation in patients with retinitis pigmentosa.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 4726-4733 (2011).</li>
<li>Saunders, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+surgical+procedure+for+implantation+of+a+prototype+suprachoroidal+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Experiment+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Development of a surgical procedure for implantation of a prototype suprachoroidal retinal prosthesis.</a> Clin Experiment Ophthalmol. , (2013).</li>
<li>Lee, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+microelectrode+arrays+for+artificial+retinal+implants+using+liquid+crystal+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Development of microelectrode arrays for artificial retinal implants using liquid crystal polymers.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 5859-5866 (2009).</li>
<li>Sakaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transretinal+electrical+stimulation+with+a+suprachoroidal+multichannel+electrode+in+rabbit+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Transretinal electrical stimulation with a suprachoroidal multichannel electrode in rabbit eyes.</a> Jpn J Ophthalmol. 48, 256-261 (2004).</li>
<li>Majji, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+histological+and+electrophysiological+results+of+an+inactive+epiretinal+electrode+array+implantation+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-term histological and electrophysiological results of an inactive epiretinal electrode array implantation in dogs.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40, 2073-2081 (1999).</li>
<li>Walter, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+long-term+implantation+of+electrically+inactive+epiretinal+microelectrode+arrays+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Successful long-term implantation of electrically inactive epiretinal microelectrode arrays in rabbits.</a> Retina. 19, 546-552 (1999).</li>
<li>Ray, A., Chan, L., Thomas, B., Weiland, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prolonged+stimulation+at+the+electrode-retina+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Conf+Proc+IEEE+Eng+Med+Biol+Soc%22%5BJournal%5D)">Effects of prolonged stimulation at the electrode-retina interface.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 1, 1285-1287 (2006).</li>
<li>Colodetti, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+damaging+electrical+stimulation+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+eye+research%22%5BJournal%5D)">Pathology of damaging electrical stimulation in the retina.</a> Experimental eye research. 85, 23-33 (2007).</li>
<li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Electrical+Stimulation+with+a+Suprachoroidal+Retinal+Prosthesis%3A+A+Preclinical+Safety+and+Efficacy+Study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chronic Electrical Stimulation with a Suprachoroidal Retinal Prosthesis: A Preclinical Safety and Efficacy Study.</a> PLoS One. 9, e97182(2014).</li>
<li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+Processing+Eyes+Implanted+With+a+Retinal+Prosthesis+for+Localized+Histopathological+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50411(2013).</li>
<li>Laube, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+surgical+techniques+for+implantation+of+a+wireless+intraocular+epiretinal+retina+implant+in+Gottingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+For+Clinical+And+Experimental+Ophthalmology+%3D+Albrecht+von+Graefes+Archiv+fur+klinische+und+experimentelle+Ophthalmologie%22%5BJournal%5D)">Development of surgical techniques for implantation of a wireless intraocular epiretinal retina implant in Gottingen minipigs.</a> Graefe's Archive For Clinical And Experimental Ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 250, 51-59 (2012).</li>
<li>Gerding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+long-term+evaluation+of+intraocular+titanium+tacks+for+the+mechanical+stabilization+of+posterior+segment+ocular+implants%5BTitle%5D)+AND+%22Mat.-wiss.+u.+Werkstofftech%22%5BJournal%5D)">Successful long-term evaluation of intraocular titanium tacks for the mechanical stabilization of posterior segment ocular implants.</a> Mat.-wiss. u. Werkstofftech. 32, 903-912 (2001).</li>
<li>Seo, J. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silicon+retinal+tack+for+the+epiretinal+%EF%AC%81xation+of+the+polyimide+electrode+array%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Silicon retinal tack for the epiretinal ﬁxation of the polyimide electrode array.</a> Current Applied Physics. 6, 649-653 (2006).</li>
<li>Hadjinicolaou, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+stimulation+of+retinal+ganglion+cells+with+diamond+and+the+development+of+an+all+diamond+retinal+prosthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Electrical stimulation of retinal ganglion cells with diamond and the development of an all diamond retinal prosthesis.</a> Biomaterials. 33, 5812-5820 (2012).</li>
<li>Briggs, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+round+window+and+cochleostomy+approaches+with+a+prototype+hearing+preservation+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Audiol+Neurootol%22%5BJournal%5D)">Comparison of round window and cochleostomy approaches with a prototype hearing preservation electrode.</a> Audiol Neurootol. 11, Suppl 1. 42-48 (2006).</li>
<li>Shepherd, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+cochlear+implant+electrode+array+for+use+in+experimental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">An improved cochlear implant electrode array for use in experimental studies.</a> Hear Res. 277, 20-27 (2011).</li>
<li>Tykocinski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+electrode+position+in+the+human+cochlea+using+various+perimodiolar+electrode+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Otol%22%5BJournal%5D)">Comparison of electrode position in the human cochlea using various perimodiolar electrode arrays.</a> Am J Otol. 21, 205-211 (2000).</li>
<li>Hardie, N. A., MacDonald, G., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+imaging+and+3D+reconstruction+of+mammalian+cochlea+by+fluorescent+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A new method for imaging and 3D reconstruction of mammalian cochlea by fluorescent confocal microscopy.</a> Brain Res. 1000, 200-210 (2004).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare. Irfan Durmo è un dipendente di Cochlear Ltd.

Tecniche istologiche standard sono in grado di elaborare le protesi in metallo duro in situ a causa di limitazioni nel taglio di questi oggetti di metallo, vetro o anche dischi diamantati. Nel nostro compagno di carta 16, abbiamo dimostrato che l&#39;uso di una tecnica di fissazione intero-eye modificato potrebbe ridurre artefatti delaminazione della retina. Nel manoscritto corrente, un consolidato smerigliatura e lucidatura tecnica per la visualizzazione di impianti cocleari 21-23 in situ è stato modificato per protesi retiniche. Una virata di titanio, utilizzato per proteggere una matrice di elettrodi alla retina, epiretinally, è stato incorporato in resina epossidica con il tessuto oculare circostante. Questo blocco di resina è stata poi orientato in modo appropriato e terra / progressivamente lucido per rivelare la morfologia del tessuto immediatamente adiacente alla virata di metallo. Immagini della superficie lucida del blocco a varie profondità sono state prese con un potente microscopio di dissezione. Questa tecnica è utile per: Visualizzazione e evaluating la risposta del tessuto adiacente all&#39;impianto epiretinal; per valutare il trauma chirurgico associato con l&#39;impianto della protesi; per determinare la reazione biologica ai componenti in metallo duro; e per misurare la distanza tra l&#39;impianto e la superficie della retina. Questa tecnica sarà utile in studi di sicurezza per future in situ visualizzazione della regione adiacente ad una virata retina o altri (ad esempio metallico) oggetti duri nell&#39;occhio. Questo ha applicazione diretta nella valutazione della sicurezza preclinica di protesi virato alla retina epiretinally. Può anche essere utile per valutare il danno tissutale in regioni retina a contatto con impianti situati in posizione sub-retinica. Ci sono diversi modi per verificare che la tecnica è stata eseguita correttamente. In ogni fase, la retina dovrebbe rimanere aderente agli strati esterni dell&#39;occhio. Se vi è il distacco di retina artefatta lordo, ciò può indianemangiato un problema con il fissaggio. Quando il campione è incorporato e ri-orientato nella resina finale bloccare la retina deve essere vicino ortogonale alla faccia di macinazione del blocco; Questo ridurrà al minimo il taglio obliquo. È utile per verificare che il numero di passaggi di macinazione incrementali (noto di step size) necessaria per attraversare un oggetto (quale un tack retinica) correlare conseguenza con le dimensioni dell&#39;oggetto. La tecnica può essere ottimizzato in diversi modi. Graffi sulla superficie del blocco epossidica associato al processo di macinazione possono essere ridotti con progressiva lucidatura grado più fine. Per questo studio, abbiamo utilizzato 800, 1000, 1200, 2400, e 4000 carta al carburo di silicio. Pasta diamante potrebbe essere utilizzato anche per migliorare la finitura superficiale. Una finitura superficiale più fine dà un&#39;immagine di qualità superiore, ma a costo di tempo lucidatura supplementare. Un&#39;altra considerazione importante per migliorare l&#39;esito di questa tecnica è la scelta e la qualità del optics e l&#39;illuminazione utilizzati per la cattura delle immagini. Altre macchie istologiche di base - in particolare le macchie di Nissl, possono essere utilizzati al posto del blu di toluidina, ma potrebbero richiedere un&#39;ulteriore ottimizzazione. Alcuni macchie si macchia la resina e il tessuto (ad esempio, eosina), quindi uno smalto superficiale può essere richiesto dopo la colorazione per rimuovere sfondo scolorimento. Macchie specializzati, coloranti fluorescenti e colorazione immunoistochimica non è stato tentato, ma a meno che un risultato molto specifica è desiderato, il tempo richiesto per eseguire queste macchie a ciascun livello di macinazione è probabile che sia proibitivi. Tuttavia, può essere possibile macchiare il tessuto nel suo insieme prima della fase di incorporamento (passo 3.4) 24. Il limite principale di questa tecnica è che una volta che la regione di interesse è stato macinato distanza, non può essere recuperato, pertanto, è prudente catturare molte immagini (eventualmente ridondanti) in una varietà di ingrandimenti in ogni fase di levigatura e lucidatura. Èanche importante utilizzare piccoli incrementi per ogni regolazione della profondità di macinazione. Un altro limite di questa tecnica è che la ingrandimento ottico e risoluzione rispetto a tessuto montato su un vetrino e visualizzato con uno standard (trasmissione) microscopio ottico. Ai fini della prototipazione e valutazione della sicurezza di un dispositivo di impianto romanzo, la valutazione patologica lordo è di interesse primario. Questa tecnica offre un metodo efficiente per osservare i danni clinicamente rilevanti associati con una virata retina. Con la pratica, il tempo complessivo necessario per raccogliere grind, polacco e fotografare un dato campione (una volta integrati) è paragonabile al tempo che ci vuole per la sezione di un blocco di paraffina o sezioni congelate. Vi è anche la possibilità per le attuali tecniche per essere esteso alle applicazioni al di fuori dell&#39;ambito di impianti retinici. Questa tecnica è adatta per valutare il tessuto adiacente ad un impianto fisso, in cui l&#39;estrazione dell&#39;impianto non feasible o danneggerebbero l&#39;interfaccia. Ad esempio, questa tecnica può essere espansa per valutare protesi in metallo (ad esempio, platino, nitinol, etc.) che non può essere tagliato con tecniche istologiche convenzionali, come alcuni cerebrale profonda o elettrodi nervose periferiche, cannule per la somministrazione di farmaci, stent vascolari o protesi ortopediche.

Retinite pigmentosa (RP) è una malattia ereditaria che provoca perdita diffusa dei fotorecettori, che sono le cellule nello strato più esterno della retina responsabile trasduzione luce, sotto forma di fotoni, in attività neurale. È importante sottolineare che i pazienti con RP hanno tipicamente neuroni residui negli altri strati della loro retina che sono ancora funzionali. Protesi retiniche sono in grado di ripristinare una certa visione limitata a questi pazienti di mira questi neuroni superstiti con stimolazione elettrica per attivare il loro percorso di 1,2 visiva. Esiti percettivi da studi clinici hanno mostrato promettenti risultati iniziali e recentemente alcuni dispositivi sono stati approvati per l&#39;uso commerciale. Attualmente, ci sono tre principali sedi anatomiche in cui sono state posizionate le protesi retiniche clinici: epiretinally 3,4, 5,6 e subretinally suprachoroidally 7,8. Dispositivi diversi utilizzano diversi materiali e la loro forma è personalizzatoalla posizione in cui sono impiantati. Tuttavia, tutti creano percezioni visive attivando i neuroni residui della retina con impulsi elettrici. Vi è la possibilità di qualsiasi protesi mediche per danneggiare il tessuto circostante a causa di effetti meccanici del collocamento iniziale o successive forze in corso. In caso di stimolatori impiantabili, quali protesi retiniche, vi è la considerazione aggiuntiva che i parametri elettrici devono essere entro limiti di sicurezza. La sicurezza del paziente è fondamentale, quindi i dispositivi deve essere rigorosamente testato in studi preclinici prima di passare alla creazione di una clinica 9-15. Nel nostro articolo compagno, abbiamo descritto un metodo per la valutazione della istopatologia localizzata dell&#39;occhio circostante un impianto posizionato nello spazio sovracoroideale 16. Nel presente manoscritto, si descrive una tecnica per la visualizzazione dei tessuti oculari che circonda una matrice di elettrodi appiccicato alla retina epiretinally, in un preclinico (feline) Modello (Figura 1). La posizione epiretinal è la posizione più comunemente utilizzato per localizzare una protesi visiva. Array elettrodi situati qui sono tipicamente apposte alla retina con una virata metallo che penetra tutti gli strati dell&#39;occhio 17-20. Prima le tecniche descritte nella presente manoscritto era difficile valutare con precisione la retina e altri tessuti immediatamente circostanti una virata. Fissazione dell&#39;occhio standard con formalina tamponata neutra provocato danni alla retina artefatta a causa del movimento differenziale della retina e sclera contro il punto fisso della mura. Pertanto i danni reali causati dalla virata e la matrice epiretinal non poteva essere osservato con precisione. Inoltre, sezionando il tessuto oculare non poteva essere eseguita con l&#39;aderenza della retina in situ come oggetti metallici non possono essere isolate con le apparecchiature tradizionali istologica; rimuovere la virata prima della trasformazione istologica era ancheindesiderabile in quanto ciò ha comportato anche danni alla retina artefatta. Lo scopo del presente studio è stato duplice: 1) per ridurre il distacco della retina manufatto in modo che eventuali danni causati dalla virata e l&#39;array dell&#39;impianto epiretinal può essere valutato in modo attendibile; e 2) per visualizzare l&#39;architettura retinica adiacente al tatto senza rimuoverla. Per raggiungere obiettivo 1, una nuova tecnica di fissaggio è stata utilizzata (come descritto nell&#39;articolo guidata 16), che riduce artefatti delaminazione retinica. Al fine di conseguire l&#39;obiettivo 2, abbiamo modificato un embedding, rettifica, e la tecnica, originariamente sviluppato per l&#39;osservazione in situ di cocleari elettrodi impianto 21-23 lucidatura. I metodi descritti in questo manoscritto consentono la visualizzazione della retina circostante e adiacente ad una virata in situ, riducendo al minimo i danni della retina artefatta e consentendo quindi una valutazione accurata di eventuali danni causati dalla virata e la matrice epiretinal.

<table><tbody><tr><td>Acetone</td><td>Chem-Supply</td><td>AA008</td><td>Propanone BHD Grado medico</td></tr><tr><td>Epo-Tek 301 Tecnologia epossidica</td><td>epossidica</td><td>Parte A 1675-54-3 Parte B 9046-10-0</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo 70-75% v/v</td><td>Merck PTY LTD</td><td>4.10261</td><td>Alcool</td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Merck PTY LTD</td><td>90143</td><td>Alcool</td></tr><tr><td>Toluidina blu O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3260</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiammina Acido tetraacetico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TegraPol rettificatrice/lucidatrice</td><td>Struers</td><td>TegraPol-25</td><td></td></tr><tr><td>AccuStop portacampioni</td><td>Struers</td><td>Accustop</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio ottico</td><td>Leica</td><td>MZ16</td><td></td></tr><tr><td>Obiettivo</td><td>Leica</td><td>2.0x Planapo Obiettivo</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera per microscopio digitale</td><td>Software per</td> microscopio Leica <td>DFC-420C</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td>Suite di applicazioni v4.1.0</td><td></td></tr></tbody></table>

tecniche di lavorazione occhi impiantati con una retina protesi per localized istopatologico analysis: part 2 epiretinica impianti con retina aderenze

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Le protesi retiniche per il trattamento di alcune forme di cecità stanno guadagnando terreno negli studi clinici in tutto il mondo con dispositivi commerciali che stanno entrando nel mercato. Per valutare la sicurezza di questi dispositivi, negli studi preclinici, sono necessarie tecniche affidabili. Tuttavia, i componenti in metallo duro utilizzati in alcune protesi retiniche non sono compatibili con i processi istologici tradizionali, in particolare in considerazione della natura delicata del tessuto circostante. Qui descriviamo le tecniche per valutare la salute dell'occhio direttamente adiacente a un impianto retinico fissato epiretinicamente con un chiodo metallico.
Le protesi retiniche sono dotate di array di elettrodi a contatto con il tessuto oculare. La posizione più comunemente utilizzata per l'impianto è la posizione epiretinica (camera posteriore dell'occhio), dove l'impianto è fissato alla retina con un puntino metallico che penetra in tutti gli strati dell'occhio. I metodi precedenti non sono stati in grado di valutare il tessuto oculare prossimale con la virata in situ, a causa dell'incapacità delle tecniche istologiche tradizionali di tagliare oggetti metallici. Di conseguenza, è stato difficile valutare il danno localizzato, se presente, causato dall'inserimento di puntine.
Pertanto, abbiamo sviluppato una tecnica per visualizzare il tessuto attorno a una puntina retinica e a un impianto. Abbiamo modificato una tecnica consolidata, utilizzata per l'elaborazione e la visualizzazione del tessuto osseo duro attorno a un impianto cocleare, per i tessuti molli e delicati dell'occhio. Abbiamo orientato e incorporato il tessuto oculare fisso, compreso l'impianto e il tack retinico, in resina epossidica, per stabilizzare e proteggere la struttura del campione. I campioni incorporati sono stati quindi macinati, lucidati, colorati e riprodotti con vari ingrandimenti a profondità incrementali attraverso il campione. Questa tecnica ha permesso una valutazione affidabile dell'integrità del tessuto oculare e della citoarchitettura adiacente alla puntina metallica.

Il protocollo di fissaggio ridotto sensibilmente il distacco artefatta e delaminazione della retina 16. Orientamento del campione all&#39;interno del blocco epossidica è stata ottenuta costantemente usando il processo incorporamento due fasi descritto. La procedura di rettifica incrementale richiesto un livello moderato di destrezza manuale per ottenere risultati ottimali, ma è stata aiutata dal titolare del campione regolabile che ha fornito un controllo preciso della risoluzione incremento. In tutti i casi (n = 5) l&#39;aderenza era situato e terra / lucidata con risultati desiderabili e coerenti. La retina adiacente alle puntine erano risolvibili e macchiato in modo appropriato. Lucidatura la superficie del blocco di resina epossidica con un grado P # 800 carta al carburo di silicio era sufficiente per l&#39;immagine macrostruttura cellulare del tessuto incorporato. Carta di grado superiore, o diamante liquami possono essere utilizzati per lucidare ulteriormente la superficie in qualsiasi data profondità se desiderato. Un microscopio dissezione e fibra ottica &#39;collo d&#39;oca&#39; lighfonte t è risultato essere adatto per l&#39;imaging la superficie del blocco di terra e il campione di tessuto incorporato. La posizione della sorgente di luce è stata variata per tentativi per trovare una posizione e angolo che ha dato il miglior illuminazione e contrasto attraverso il microscopio. Aggiunta di una goccia d&#39;acqua distillata alla superficie del blocco, sopra il campione, era utile per ridurre la luce di diffrazione percorso e / o distorsioni lisce all&#39;interfaccia epossidico. Figura 4 mostra esempio immagini di tessuto retinico visualizzate immediatamente adiacente ad una retina di titanio virare utilizzando questa tecnica. Non artefatta distacco della retina e pieghevole può essere visto su entrambi i lati del silicone (Figura 4A). L&#39;albero tack è visibile incorporato in silicone; la testa del tack è penetrato retina e sclera. C&#39;è non artefatta distacco di retina nella retina macchia lati del silicone (Figura 4C). La tecnica ha mostrato che, in questo caso, there è disorganizzazione retinica adiacente alla aderenza e la compressione della retina da un lato a causa di un angolo di inserimento obliquo. Si noti che le immagini presentate sono meramente illustrazioni del successo della tecnica, non rappresentativi della tack-danni istopatologia in generale. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52348/52348fig1highres.jpg" /> Figura 1. Posizionamento di una matrice di elettrodi epiretinal. (A) Schema dell&#39;occhio che mostra una sezione trasversale ingrandita del posteriore sclera, coroide e retina degenerata (privo fotorecettori). Un array di elettrodi è rappresentato in blu, apposto epiretinally. (B) Computer-aided-disegno di un array di elettrodi epiretinal. un circuito integrato (&#39;chip&#39;) e il pacchetto elettrodi; b, titanio tack retina; c, custodia in silicone per uso medico; d, punto di uscita piombo. Pannello A modificato da un illustrati originalisu gentile concessione di Bionic Vision Australia, autore Beth Croce. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig1large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52348/52348fig2highres.jpg" /> Figura 2. Rimozione degli elettrodi e la dissezione dell&#39;occhio. Alta gamma dinamica fotografie macro di un occhio felino enucleato con tack epiretinal in situ. (A) Condividi fissazione con fissativo di Davidson per preservare l&#39;architettura della retina 16, l&#39;occhio enucleato è stato sezionato. Il pacchetto matrice di elettrodi è stato rimosso dal supporto di silicone (tratteggiata contorno quadrato indica posizione originale di matrice di elettrodi) con la tack (freccia) ed il corpo di silicone dell&#39;impianto restante. (B) L&#39;occhio è stato sezionato con la sezione longitudinale adiacente bordeggiare(Linea tratteggiata). La virata resta incorporato nella parete posteriore del oculare (freccia), stabilizzato prevalentemente dalla sclera. La sezione di tessuto contenente il tack è stato preparato per incorporamento resina e macinazione (segmento destra), mentre la sezione contenente retina sotto la matrice di elettrodi rimosso è stato preparato per l&#39;elaborazione istologica campione 16 (segmento a sinistra). Un righello con incrementi di 0,5 millimetri è mostrato sul bordo inferiore di ogni pannello. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52348/52348fig3highres.jpg" /> Figura 3. embedment epossidica e rettifica della mura e tessuto retinico. Fotografie della resina epossidica integrata e campione di tessuto allineati, rettifica, colorazione e di imaging della mura e tessuto retinico. (A) La tac<html> k campione è stato incorporato in un blocco di resina epossidica. Utilizzando lo stampo, il campione è stato orientato in modo che il piano longitudinale è parallelo al fondo dello stampo. (B) Il blocco resina catalizzata contenente il campione tack. (C) Il blocco epossidica è stato montato in un portacampioni molatura, pronto per la macinazione . (D) Il campione è stato orientato in modo imaged sezioni del tessuto terra contengono gli strati cellulari retinici e l&#39;asse longitudinale del tack. (E) Il campione è stato macinato con carta carburo di silicio su un macinino rotativo. (F) La superficie terra il blocco è stato macchiato con toluidina blu per identificare gli strati retinici. (G) Il blocco è stato lavato in acqua di rubinetto per rimuovere l&#39;eccesso macchia. (H) La toluidina blu macchiati strati retinici e virata sono stati ripresi utilizzando una portata elevata dissezione potenza. annuncio / 52.348 / 52348fig4highres.jpg &quot;/&gt; Figura 4. immagini di potenza alta e bassa della virata e della retina. In vari punti durante le immagini di processo di macinazione sono state scattate con un ambito dissezione, mostrando sezioni longitudinali della virata (asterisco) che penetrano attraverso l&#39;occhio e in uscita la sclera (&#39;S&#39; ), adiacente silicone (hash) e blu di toluidina macchiato e retina senza macchia (&#39;R&#39;). Nota questi sono esempi di immagini solo per dimostrare la presenza tecnica di visualizzazione, e non sono rappresentative di tutti di impianto o tack risultati istologici inserimento epiretiniche. Resti di terra del cablaggio platino sono visibili in pannelli AD (&#39;W&#39;). (A) a basso consumo, immagine senza macchia della mura penetrare la retina e sclera. (B) Immagini di alta potenza del distacco della retina e pieghevole in retina senza macchia adiacente al vettore silicone immagine A. (C) immagine a bassa potenza in al centro dell&#39;albero tack. <strong&gt; (D) Immagine di alta potenza del centro tack nell&#39;immagine C. (E) In un campione separato, con nessun vettore silicone, viene mostrata una immagine di alta potenza di blu di toluidina retina macchiato sotto l&#39;impugnatura tack, immediatamente prima rettifica l&#39;albero virata (F) toluidina Normale blu macchiato architettura retina (GCL: strato di cellule gangliari della retina; INL: strato nucleare interno; ONL: strato nucleare esterno; PR: fotorecettori; T: felino tapetum lucidum). visualizzata utilizzando la stessa tecnica di rettifica . Barre di scala in ogni pannello sono: A e C = 2 mm B e D = 500 micron; E = 200 micron; F = 100 micron.

Qui descriviamo le tecniche istologiche per visualizzare il tessuto oculare direttamente adiacente a una virata epiretinica metallica e a una protesi retinica.

Tecniche di lavorazione occhi impiantati con una retina Protesi per Localized istopatologico Analysis: Part 2 epiretinica impianti con retina aderenze

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Le protesi retiniche con componenti metallici rigidi non sono compatibili con i tradizionali processi istologici. Qui descriviamo tecniche per valutare lo stato di salute dell'occhio direttamente adiacente a un impianto retinico fissato in posizione epiretinica mediante una T metallica. Questo viene ottenuto innanzitutto nucleando e fissando l'occhio secondo il protocollo descritto in un video correlato, quindi dissezionando un campione di tessuto che include l'impianto e la T retinica. Il secondo passaggio consiste nel disidratare progressivamente il campione di tessuto e successivamente incorporarlo in una resina epossidica nell'orientamento desiderato, mediante un processo di inclusione in due fasi. Successivamente, il blocco finale di resina viene montato in un apposito supporto e levigato gradualmente fino a quando una sezione trasversale attraverso l'impianto e il tessuto oculare circostante viene esposta al livello desiderato.L'ultimo passaggio consiste nella colorazione superficiale del tessuto esposto, seguita da acquisizione di immagini e fotografie mediante un microscopio stereoscopico ad alta potenza per visualizzare l'architettura cellulare adiacente alla protesi impiantata. Questi passaggi vengono quindi ripetuti più volte secondo necessità. Alla fine, viene raccolta una serie di immagini a sezione trasversale del campione di tessuto, compresa la protesi in situ, che possono essere utilizzate per perfezionare il design del dispositivo o dell'intervento chirurgico, nonché per supportare la valutazione della sicurezza della particolare protesi.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come l'istologia con taglio tradizionale mediante lama, è che gli oggetti impiantati nel cuore, inclusi componenti metallici, possono rimanere in situ durante la procedura, consentendo la visualizzazione dell'interfaccia tra impianto e tessuto. Questo metodo può rispondere a domande fondamentali nel campo delle protesi retiniche, ad esempio valutando l'integrità strutturale del tessuto oculare delicato adiacente a una protesi retinica impiantata. Dopo l'enucleazione dell'occhio e la fissazione come descritto in un video JoVE associato, visualizzare l'impianto e il punto in cui è fissato all'esterno dell'occhio.Utilizzando una lama di 15 gradi, effettuare un'incisione transcorneale circonferenziale e rimuovere il cappuccio corneale per esporre l'interno del bulbo oculare. Si noti che il cristallino è stato precedentemente asportato durante la lensectomia-vitrectomia, che fa parte della procedura chirurgica per questo impianto epiretinico.Quindi disinfettare, inserire l'iride e qualsiasi fibra Z residua del cristallino per esporre la camera posteriore con l'impianto epiretinico e il metallo T in situ. A seconda dell'impianto e dello studio in corso, rimuovere le componenti estranee prima di proseguire la dissezione. Nell'esempio attuale, l'array epiretinico in esame è costituito da un prototipo ermetico, con un elettrodo in diamante e un pacchetto di elettronica alloggiati all'interno di un supporto in silicone conformale.Dissezionare con attenzione un campione che includa il chiodo e il tessuto circostante nell'orientamento desiderato. Utilizzare forbici da dissezione fini per tagliare strisce a tutto spessore dalla parte posteriore dell'occhio, inclusa la sclera, la coroide e la retina. Estrarre quindi con cura il pacchetto dell'elettrodo a diamante mediante una dissezione fine con il bisturi.Lasciare il corpo in silicone dell'impianto insieme al puntino retinico e ai residui del cablaggio in platino. Prelevare un campione che fornisca una sezione trasversale longitudinale del puntino, mostrando tutti gli strati retinici adiacenti al puntino. Quindi reinserire il campione in etanolo al 70%.Disidratare il campione per tre giorni in stadi progressivi di etanolo. Inizialmente, disidratare il campione in etanolo al 70% per due ore, due volte. Successivamente, disidratare il campione in etanolo all'80% per due ore, due volte, e poi il giorno successivo proseguire con la disidratazione in etanolo al 90% per due ore, due volte, lasciando inoltre in disidratazione tutta la notte. Procedere quindi con la disidratazione del campione in etanolo al 100% per due ore, due volte, e poi nuovamente tutta la notte.Infine, disidratare il campione in acetone al 100% per due ore, due volte. Rimuovere il campione dall'acetone e osservarlo al microscopio ottico mentre si asciuga all'aria a temperatura ambiente. La rimozione del liquido dai tessuti molli provoca il collasso delle cellule e il restringimento.Il campione verrà trasferito nell'epossidico poco prima che inizi ad arricciarsi e collassare. L'esperienza permette di riconoscere il momento in cui avviene l'arricciamento e il collasso del tessuto. Per incorporare il campione in una resina epossidica trasparente, immergere il tessuto oculare nell'epossidico liquefatto all'interno di un contenitore sigillabile adeguato.Depurare delicatamente l'epossidica in una camera a vuoto e lasciarla polimerizzare tutta la notte a temperatura ambiente. Prestare attenzione a incapsulare il campione nell'orientamento desiderato, ridimensionando il blocco di epossidica polimerizzata e il campione con una sega a nastro e una lamina. Posizionare il blocco ridimensionato contenente il tessuto oculare in una nuova quantità di epossidica liquefatta in modo che l'asse longitudinale del campione sia orientato parallelamente al fondo dello stampo. Utilizzare una goccia di colla istantanea per fissare saldamente il campione ridimensionato al fondo del portacampione.Riempire il portacampioni con l'epossidico liquefatto e sottoporlo a degasaggio come in precedenza, quindi lasciarlo polimerizzare tutta la notte. Montare quindi la resina in un portacampioni per rettifica e rettificare manualmente il campione a 230-250 giri/min con acqua in circolo utilizzando carta abrasiva al carburo di silicio. Per la colorazione, immergere la superficie rettificata nella soluzione di blu di toluidina per tre-cinque minuti o fino a quando non si sviluppa la colorazione.Dopo aver sciacquato il campione con acqua del rubinetto, acquisire un'immagine della superficie levigata del campione utilizzando un microscopio stereoscopico ad ingrandimento superiore. Per visualizzare i livelli cellulari della retina, applicare una goccia di acqua distillata sulla superficie superiore dell'epossidica appena sopra il campione. Per ridurre la diffrazione all'interfaccia aria-epossidica.Utilizzare una sorgente luminosa a fibra ottica con collo d'oca per illuminare il campione. Ripetere i passaggi di macinazione e acquisizione delle immagini ogni volta che si rimuove uno spessore preimpostato di campione. L'incremento minimo di macinazione preciso e riproducibile del portacampione è di 20 micron.Questo processo viene ripetuto in modo incrementale fino a quando una sezione trasversale attraverso l'impianto e il tessuto oculare circostante viene esposta al livello desiderato. Qui di seguito sono mostrate immagini di esempio di tessuto retinico visualizzato immediatamente adiacente a un chiodo retinico in titanio in diversi punti durante il processo di levigatura. Le immagini mostrano sezioni longitudinali del chiodo che penetra attraverso l'occhio ed esce dalla sclera, con retina adiacente in silicone e colorata o non colorata con blu di toluidina.Distacchi retinici e piegature non artefatti possono essere osservati su entrambi i lati del silicone sia a basso che ad alto ingrandimento. L'asta dello spilluccio è visibile incorporata nel silicone, e la testa dello spilluccio ha penetrato la retina e la sclera. In questo caso è evidente la presenza di distacco retinico non artefatto nella retina non colorata su entrambi i lati del silicone, osservato sia a basso che ad alto ingrandimento.L'esempio ha mostrato un disordine retinico adiacente al punto di fissaggio e una compressione della retina su un lato dovuta a un angolo di inserzione obliquo. Nel tentativo di eseguire questa procedura, è importante ricordare di inserire, orientare e montare attentamente il campione, in modo che le superfici ottenute per abrasione risultino allineate nel piano desiderato. Inoltre, dovrebbero essere acquisite molteplici fotografie a ogni stadio di abrasione, poiché i campioni abrasi non possono essere recuperati oggi.Questo metodo può fornire informazioni sull'istologia della protesi retinica. Può inoltre essere applicato per visualizzare l'interfaccia tra dispositivo e tessuto in altri sistemi che utilizzano componenti impiantati rigidi, come impianti cerebrali profondi, stent vascolari o protesi ortopediche.

techniques-for-processing-eyes-implanted-with-retinal-prosthesis-for

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Il documento descrive una tecnica semplificata per corneale accise e di sviscerare i tessuti della retina dal globo oculare di donatori cadaveri umani. La tecnica qui descritta aiuterà a accise tessuti di buona qualità da usare per il trapianto, a fini chirurgici o di ricerca senza danneggiare altri tessuti del globo oculare.

Una tecnica semplificata per<em&gt; In situ</emEscissione&gt; della cornea e l&#39;eviscerazione del tessuto retinico dal globo oculare umano

Tecniche per visualizzare citoarchitettura retinico direttamente adiacente singoli elettrodi all'interno di uno stimolatore retinica.

Tecniche di lavorazione occhi impiantati con una protesi retinica per analisi istopatologica localizzato

Il protocollo qui descritto è per la valutazione strutturale di una preparazione retinica a montaggio intero. Ciò include le descrizioni della dissezione tissutale, il montaggio su un inserto di membrana in politetrafluoroetilene idrofilizzato (PTFE), il caricamento del bolo con marcatori fluorescenti e un confronto della fissazione con carbodiimmide e paraformaldeide per l'analisi immunoistochimica dei componenti cellulari e sinaptici.

Protocollo ottimizzato per la preparazione dell'intero montaggio retinico per l'imaging e l'immunoistochimica

Qui presentiamo un protocollo accettato dalla comunità in formato multimediale per l'iniezione sottoretinica di un bolo di cellule RPE in ratti e topi. Questo approccio può essere utilizzato per determinare i potenziali di salvataggio, i profili di sicurezza e le capacità di sopravvivenza delle cellule RPE trapiantate dopo l'impianto in modelli animali di degenerazione retinica.

Esecuzione sottoretinico Iniezioni in roditori di agire cellule retiniche epitelio pigmentato in sospensione

Epitelio pigmentato retinico (RPE) strategie di sostituzione e la terapia genica basati sono considerati per diverse condizioni degenerative della retina. Per la traduzione clinica, modelli di grandi dimensioni occhio animali sono tenuti a studiare tecniche chirurgiche applicabili nei pazienti. Qui vi presentiamo un modello di coniglio per la chirurgia sottoretinico orientata verso il trapianto di RPE, che è versatile ed economico.

Un passo per passo protocollo per la chirurgia sottoretinico in Conigli

Cellule epiteliali del pigmento retinico potrebbero servire come una terapia di sostituzione delle cellule per la forma avanzata di degenerazione maculare senile secca. Questo protocollo descrive la generazione di un modello di grande-eyed di atrofia geografica e il subretinal trapianto delle cellule epiteliali del pigmento retinico derivati da cellule staminali embrionali umane in questo modello della malattia.

Subretinal trapianto delle cellule epiteliali del pigmento retinico derivato di cellule staminali embrionali umane in un modello di atrofia geografica gran-eyed

Questo studio mira a sviluppare un nuovo modello di coltura retinica organotipica umana (HORC) che impedisce di compromettere l'integrità retinica durante la manipolazione dell'espianto. Ciò si ottiene coltivando la retina con il vitreo sovrastante e il pigmento retinico sottostante epitelio-coroide (RPE-coroide) e sclera.

Caratterizzazione di una nuova tecnica di coltura retinica organotipica umana

Il primate non umano (NHP) è un modello ideale per lo studio delle terapie cellulari retiniche umane a causa delle somiglianze anatomiche e genetiche. Questo manoscritto descrive un metodo per il trapianto submaculare di cellule epiteliali pigmentate retiniche nell'occhio NHP e strategie per prevenire le complicanze intraoperatorie associate alla manipolazione maculare.

Trapianto di epitelio pigmentato retinico in un modello di primati non umani per malattie degenerative della retina

La modifica dell'array multielettrodo esistente o delle apparecchiature patch clamp rende l'elettroretinogramma ex vivo più ampiamente accessibile. Metodi migliorati per registrare e mantenere le risposte alla luce ex vivo facilitano lo studio della funzione dei fotorecettori e delle cellule bipolari ON nella retina sana, nei modelli animali di malattie degli occhi e nelle retine dei donatori umani.

Ottimizzazione della configurazione e delle condizioni per l'elettroretinogramma ex vivo per studiare la funzione della retina in occhi piccoli e grandi

La retina mostra una complessa organizzazione spaziale attraverso la sua struttura laminare. Le moderne tecniche di trascrittomica spaziale e sequenziamento richiedono sezioni di tessuto &lt; 20 μm di spessore, limitandone l'applicabilità nella ricerca retinica. Questo metodo di criosezione appena congelato produce sottili sezioni en face della retina di topo preservando le relazioni spaziali planari, consentendo una mappatura molecolare completa tra le lamine.

En face Criosezione della retina di topo per analisi molecolare spaziale ad alta dimensione

Impara tecniche istologiche per valutare la salute oculare adiacente a protesi retiniche epiretinali con componenti metalliche. Questo metodo consente la visualizzazione in situ dell'interfaccia tessuto-impianto.

Tecniche di lavorazione occhi impiantati con una retina Protesi per Localized istopatologico Analysis: Part 2 epiretinica impianti con retina aderenze (Video) | JoVE Journal

Tecniche di lavorazione occhi impiantati con una retina Protesi per Localized istopatologico Analysis: Part 2 epiretinica impianti con retina aderenze

Esplora altri video