Tecniche di lavorazione occhi impiantati con una retina Protesi per Localized istopatologico Analysis: Part 2 epiretinica impianti con retina aderenze

Le protesi retiniche con componenti in metallo duro non sono compatibili con i processi istologici tradizionali. Qui descriviamo le tecniche per valutare la salute dell'occhio direttamente adiacente a un impianto retinico fissato epiretinico con un metallo T.Ciò si ottiene prima nucleando e fissando l'occhio secondo il protocollo descritto in un video di accompagnamento, e poi sezionando un campione di tessuto, che include l'impianto e il retinico T.Il secondo passo è quello di disidratare progressivamente il campione di tessuto e quindi incorporarlo in una resina epossidica in l'orientamento desiderato utilizzando un processo di incorporamento in due fasi. Successivamente, il blocco di resina finale viene montato in un supporto speciale e macinato in modo incrementale fino a quando una sezione trasversale attraverso l'impianto e il tessuto oculare circostante viene esposta al livello desiderato.

Il passaggio finale consiste nel colorare la superficie del tessuto esposto, quindi nell'immagine e nella fotografia con un microscopio da dissezione ad alta potenza per visualizzare l'architettura cellulare adiacente alla protesi impiantata. Questi passaggi vengono poi ripetuti più volte in base alle esigenze. In definitiva, vengono raccolte una serie di immagini in sezione trasversale attraverso il campione di tessuto, compreso l'impianto in situ, che possono essere utilizzate per perfezionare il design del dispositivo o dell'intervento chirurgico, oltre a contribuire a valutare la sicurezza della particolare protesi.

Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come l'istologia tradizionale del taglio a lama, è che gli oggetti impiantati nel cuore, compresi i componenti metallici, possono rimanere in situ durante la procedura, consentendo la visualizzazione dell'interfaccia del tessuto implantare. Questo metodo può rispondere a domande chiave nel campo delle protesi retiniche, come la valutazione dell'integrità strutturale del delicato tessuto oculare adiacente a una protesi retinica impiantata. Dopo l'enucleazione dell'occhio e la fissazione come descritto in un video JoVE di accompagnamento, visualizza l'impianto e il punto in cui è fissato all'esterno dell'occhio.

Utilizzando una lama da 15 gradi. Praticare un'incisione transcorneale circonferenziale e rimuovere il cappuccio corneale per rivelare l'interno del bulbo oculare. Si noti che la lente è stata precedentemente rimossa durante la vitrectomia per lensectomia, che fa parte della procedura chirurgica per questo impianto epiretinico.

Quindi, disin, inserire l'iride e le eventuali fibre Z residue del cristallino per rivelare la camera posteriore con l'impianto epiretinico e la T metallica in situ. A seconda dell'impianto e dello studio da eseguire, rimuovere i componenti estranei prima di un'ulteriore dissezione. Nel presente esempio, l'array epiretinico in fase di valutazione è costituito da un prototipo ermetico, da un elettrodo di diamante e da un pacchetto elettronico alloggiato all'interno di un supporto in silicone conforme.

Sezionare con cura un campione che includa l'adesività e il tessuto circostante nell'orientamento desiderato. Usa le forbici per dissezione fine per tagliare strisce a tutto spessore dalla parte posteriore dell'occhio, tra cui sclera, coroide e retina. Qui estrarre con cura il pacchetto di elettrodi diamantati mediante dissezione fine con il bisturi.

Lasciare il corpo in silicone dell'impianto insieme alla puntina retinica e ai resti del cablaggio in platino. Prelevare un campione che fornisca una sezione trasversale longitudinale della virata che mostri tutti gli strati retinici adiacenti alla virata. Quindi riportare il campione al 70% di etanolo.

Disidratare il campione per tre giorni in fasi progressive di etanolo. Innanzitutto, disidratare il campione in etanolo al 70% per due ore, due volte. Successivamente, disidratare il campione in etanolo all'80% per due ore due volte, quindi durante la notte il giorno successivo disidratare il campione in etanolo al 90% per due ore due volte procedere a disidratare il campione in etanolo al 100% per due ore due volte, quindi durante la notte.

Infine, disidratare il campione in acetone al 100% per due ore due volte. Rimuovere il campione dall'acetone e osservarlo al microscopio ottico mentre si asciuga all'aria a temperatura ambiente. La rimozione del liquido dai tessuti molli provoca il collasso delle cellule e il restringimento.

Il campione verrà trasferito su resina epossidica appena prima che inizi ad arricciarsi e collassare. L'apprezzamento di quando si verifica l'arricciamento e il collasso del tessuto si sviluppa con l'esperienza. Per incorporare il campione in resina epossidica trasparente, immergere il tessuto oculare in resina epossidica liquefatta in un contenitore sigillabile appropriato.

Degassare delicatamente la resina epossidica in una camera a vuoto e lasciarla per una notte a temperatura ambiente per indurire. Fare attenzione a incorporare il campione nell'orientamento desiderato ridimensionando la resina epossidica polimerizzata e campionare con una sega a nastro e un'ancia Il blocco ridimensionato contenente il tessuto oculare in resina epossidica liquefatta fresca in modo tale che l'asse lungo della puntina sia orientato parallelamente al fondo dello stampo. Utilizzare un po' di super colla per fissare il campione di ridimensionamento sul fondo del supporto del campione.

Riempire il portacampione con resina epossidica liquefatta e degassare come prima, lasciare indurire per una notte. Quindi montare la resina in un portacampioni di macinazione e macinare manualmente il campione a 230-250 giri/min con l'acqua utilizzando carta al carburo di silicio. Per la colorazione, immergere la superficie del terreno in una macchia blu per tre o cinque minuti o fino a quando la macchia non si sviluppa.

Dopo aver risciacquato il campione con acqua di rubinetto, visualizzare la superficie del terreno del campione con una dissezione di potenza maggiore. Portata. Per visualizzare gli strati cellulari della retina, applicare una goccia di acqua distillata sulla superficie superiore della resina epossidica appena sopra il campione. Per attenuare la diffrazione all'interfaccia epossidica dell'aria.

Utilizzare una sorgente luminosa a collo d'oca in fibra ottica per illuminare il campione. Ripetere le fasi di macinazione e imaging ogni volta che si macina uno spessore preimpostato di campione. L'incremento minimo di rettifica preciso e riproducibile del portacampioni è di 20 micron.

Questo processo viene ripetuto in modo incrementale fino a quando una sezione trasversale attraverso l'impianto e il tessuto oculare circostante viene esposta al livello desiderato. Mostrato. Di seguito sono riportate immagini di esempio di tessuto retinico visualizzato immediatamente adiacente a una T retinica in titanio in vari punti durante il processo di rettifica. Le immagini mostrano sezioni longitudinali della puntina che penetrano attraverso l'occhio ed escono dalla sclera adiacente alla retina colorata e non colorata in silicone e toluidina blu.

Il distacco e il ripiegamento della retina non artefatti possono essere visti su entrambi i lati del silicone sia a bassa che ad alta potenza. L'asta della virata è visibile incorporata nel silicone e la testa della virata è penetrata nella retina e nella sclera. Qui è evidente che c'è un distacco di retina non artificiale nella retina non colorata su entrambi i lati del silicone visualizzato sia a bassa che ad alta potenza.

L'esempio ha dimostrato che c'è una disorganizzazione retinica adiacente alla virata e una compressione della retina su un lato a causa di un angolo di inserzione obliquo. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordarsi di incorporare, orientare e lamellare il campione con cura, in modo che le superfici di terra risultanti siano allineate nel piano desiderato. Inoltre, è necessario raccogliere più fotografie in ogni fase di macinazione, poiché i campioni di terreno non possono essere recuperati oggi.

Questo metodo può fornire informazioni sull'istologia delle protesi retiniche. Può anche essere applicato per visualizzare l'interfaccia tissutale del dispositivo in altri sistemi che utilizzano componenti impiantati rigidi come impianti cerebrali profondi, stent vascolari o protesi ortopediche.