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DOI: 10.3791/52824-v
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Traffico Receptor modula la segnalazione e la cellula di risposta ai ligandi ed è, a sua volta, sensibile alle condizioni di cellulari, tra cui la segnalazione ligando-indotta. Qui, descriviamo una tecnica potente e flessibile per la valutazione quantitativa farmaco-indotta traffico recettoriale utilizzando immunomarcatura e analisi colocalizational.
L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di valutare quantitativamente la colocalizzazione spaziale di coppie bersaglio, in questo caso, esaminando il traffico di recettori indotto da farmaci. Ciò si ottiene trattando le cellule vive in coltura con farmaci per indurre un traffico di recettori alterato. Come seconda fase, la doppia marcatura immunologica dei recettori bersaglio e dei compartimenti di traffico intracellulare consente la localizzazione spaziale delle coppie bersaglio mediante microscopia confocale multicanale.
L'analisi quantitativa di colocalizzazione viene utilizzata per misurare la tendenza dei recettori bersaglio e dei compartimenti a trovarsi nello stesso luogo. I risultati mostrano cambiamenti nel traffico dei recettori in seguito al trattamento farmacologico basato sulla colocalizzazione dei recettori e dei compartimenti del traffico intracellulare. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la colocalizzazione in overlay, è che fornisce misure quantificate di colocalizzazione, che consentono analisi molto più potenti e disegni sperimentali complessi.
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