Controllo ottico di una proteina neuronale Utilizzando un acido Innaturale Amino geneticamente codificata in neuroni

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di controllare otticamente la funzione di una proteina neuronale utilizzando un amminoacido geneticamente codificato e innaturale nei neuroni. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sul contributo di una specifica proteina neuronale alla segnalazione neuronale nella funzione cerebrale con risoluzione temporale spaziale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che ha il potenziale per essere applicata a varie proteine neuronali per ottenere la regolazione ottica di vari processi neuronali.

Iniziare questa procedura placcando i neuroni dell'ippocampo su vetrini coprioggetti in una piastra a 24 pozzetti con 500 microlitri di terreno di crescita, dopo aver filtrato attraverso una rete di nylon di 40 micrometri. Successivamente, incubare la coltura neuronale a 35 gradi Celsius in un incubatore umidificato ad aria al 5% di anidride carbonica e al 95% per 2 o 3 settimane. Il giorno della trasfezione, preparare una soluzione fresca di cloruro di calcio 2,5 molari in acqua distillata doppia e filtrarla sterile con un filtro da 0,22 micrometri.