Name: Isolamento e caratterizzazione citometria a flusso di Murine Piccolo intestinale Linfociti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Impara l'isolamento e la caratterizzazione citometrica dei linfociti intestinali murini. Questo metodo rapido e riproducibile facilita lo studio dell'immunità mucosa e del ruolo del microbiota nel sistema immunitario intestinale.

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Tutti gli studi sono stati condotti in esame rigoroso e linee guida secondo il Comitato Istituzionale Animal Care e Usa (IACUC) presso la Harvard Medical School, che risponde alle norme veterinarie stabilite dalla American Association for Laboratory Animal Science (AALAS). 1. orizzontale trasmissione di batteri attraverso Co-housing (opzionale) <ol><li> Per ridurre al minimo la contaminazione esogena (in particolare se si utilizza topi gnotobiotic), praticare la tecnica asettica, mentre l&#39;assemblaggio gabbie sterili monouso, con cibo e acqua che sono stati entrambi in autoclave. </li><li> Utilizzare i punzoni auricolari o tag per contrassegnare individualmente 6 settimane di età C57BL / 6 topi che porto diverse microbiotas e li ospitano nella stessa gabbia. Dato che i topi sono coprofagiche e mangiare pellet fecali dal pavimento della gabbia, i microbi saranno naturalmente trasmesse orizzontalmente tra i topi. </li><li> topi Co-house per ≥1 settimana per dare il tempo per il trasferimento microbica e di cambiamento immunologico prima dell&#39;analisi. </li></ol&gt; 2. Preparazione di una cella singola sospensione dallo strato intraepiteliale piccola intestinale e lamina propria <ol><li> Preparazione delle soluzioni <ol><li> Preparare mezzi di estrazione (per tenue): 30 ml RPMI + 93 microlitri 5% (w / v) ditiotreitolo (DTT) + 60 ml di 0,5 M EDTA + 500 microlitri di siero fetale bovino (FBS). Aggiungere il DTT immediatamente prima dell&#39;uso. </li><li> Preparare supporti digestione (per intestino tenue): 25 ml RPMI + 12,5 mg dispasi + 37,5 mg di collagenasi II + 300 microlitri FBS. Aggiungere il dispasi e collagenasi immediatamente prima dell&#39;uso. </li><li> Per tutte le incubazioni eseguite a 37 ° C, le soluzioni Preriscaldate a 37 ° C. </li></ol></li><li> Eutanasia il mouse da CO 2 asfissia seguita da dislocazione cervicale. </li><li> Posizionare il lato del mouse dorsale verso il basso e spruzzare l&#39;addome con il 70% di etanolo. Utilizzare le forbici per eseguire una laparotomia dalla sequenza tagliare la pelle e la fascia poi peritoneale lungo la linea mediana ventrale from sinfisi pubica al processo xifoideo, esponendo così la cavità peritoneale. </li><li> Usare le forbici per separare il piccolo intestino dallo stomaco da sezionare lo sfintere piloro. Rimuovere delicatamente l&#39;intestino tenue dal peritoneo, prendere in giro il grasso mesenterico. <ol><li> Per rimuovere completamente l&#39;intestino tenue, effettuare un secondo taglio alla giunzione ileo-cecale. Posizionare il piccolo intestino isolato in fredda (es., 4 ° C) RPMI contenente 10% FBS per massimizzare la vitalità cellulare. </li></ol></li><li> Rimuovere delicatamente grandi pezzi di grasso con pinze curve. Usare cautela per evitare di strappare il tessuto intestinale in sé durante il tentativo di rimuovere il grasso. </li><li> Per rimuovere contenuto intestinale, intestino delicatamente a filo con 15 - 20 ml di PBS freddo utilizzando un ago di alimentazione 18 G apposto una siringa. </li><li> Usare le forbici per recidere PP, e metterli in RPMI freddo contenente il 5% di FBS. PP si trovano sul lato antimesenterico dell&#39;intestino tenue e appare come un bianco multi-lobulatimassa. A seconda del ceppo specifico, un mouse ha tipicamente 8 - 12 PP. </li><li> Tagliare il piccolo intestino in 3 - 4 segmenti pollici. </li><li> Rimuovere il grasso residuo da dolci ogni piccolo-intestinale segmento su un tovagliolo di carta inumidito con RPMI, utilizzando un bisturi noioso per prendere in giro il grasso dal tessuto. </li><li> Ruotare il tessuto all&#39;interno da cannulating segmenti intestinali con pinze curve e afferrando l&#39;estremità distale del tessuto. Quindi utilizzare un paio di pinze diritte per rimuovere delicatamente il segmento di tessuto dalle pinze curve (a partire dalla fine prossimale), con conseguente tessuto che viene invertita. </li><li> Posizionare i segmenti di tessuto in una tazza contenente 30 ml di mezzi di estrazione e un ancoretta. Fissare il coperchio sulla tazza, e mescolare a 500 rpm per 15 min a 37 ° C; agitazione dovrebbe essere vigoroso, ma non turbolenta. </li><li> Dopo l&#39;incubazione, utilizzare un filtro in acciaio per separare pezzi di tessuto dal surnatante dell&#39;epitelio contenente, che dovrebbe apparire torbida. Questo surnatante contiene ilinfociti ntraepithelial che può essere ulteriormente analizzati, se desiderato, procedendo a filtrare il campione in passi 2.18 - 2.23. </li><li> Agitare manualmente i pezzi di tessuto in RPMI per lavare via i media di estrazione residui. </li><li> Posizionare il tessuto su un tovagliolo di carta asciutto e capovolgere su se stesso più volte per facilitare la rimozione del muco residui che non è stato liberato dal mezzo di estrazione. </li><li> Posizionare frammenti di tessuto in una provetta da 1,5 ml con 600 ml di mezzo di digestione. </li><li> Usare le forbici per tritare il tessuto fino a pezzi aderiscono più alle forbici e la soluzione appare omogenea. Questo passaggio è fondamentale per garantire la completa digestione enzimatica del tessuto. </li><li> Aggiungere tenue macinata ad una tazza contenente 25 ml di mezzi di digestione. Mescolare a 500 rpm per 30 min a 37 ° C. A metà della digestione (cioè., A 15 min), pipettare su e giù con una pipetta sierologica per contribuire a spezzare eventuali grossi pezzi di tessuto. </li><li> Filtro tessuto digerito (o epithstrato Elial dal punto 2.12 se IELS di elaborazione) attraverso un colino cella di 100 micron in un tubo da 50 ml. Risciacquare il filtro con 20 ml di RPMI contenente 10% FBS. </li><li> Centrifugare la soluzione filtrata a 500 xg per 10 min a 4 ° C. </li><li> decantare con cautela il surnatante e risospendere pellet in 1 ml di RPMI contenente 10% FBS. </li><li> Filtro risospeso cellule attraverso un filtro 40 micron cellule in una provetta da 50 ml. Lavare il filtro con 20 ml di RPMI contenente 10% FBS. </li><li> Centrifugare soluzione filtrata a 500 xg per 10 min a 4 ° C. </li><li> decantare con attenzione il surnatante, e risospendere pellet in 1 ml di RPMI contenente il 2% FBS. </li></ol> 3. Preparazione di una cella sospensione singola da placche di Peyer <ol><li> Trasferimento asportato PP ad una tazza con 25 ml di mezzi di digestione e di un ancoretta. coperchio sicuro, e far girare a 500 giri al minuto per 10 minuti a 37 ° C. </li><li> Filtro digerito PP attraverso un filtro 40 micron cellule in una provetta da 50 ml. Se una qualsiasi grumi remain, premerli attraverso il filtro utilizzando l&#39;estremità piatta del pistone da una siringa da 1 ml. </li><li> Risciacquare il filtro con 10 ml di RPMI contenente 10% FBS. </li><li> Centrifugare soluzione filtrata a 500 xg per 10 min a 4 ° C. </li><li> decantare con attenzione il surnatante, e risospendere pellet in 1 ml di RPMI contenente il 2% FBS. </li></ol> 4. colorazione della superficie per citometria a flusso <ol><li> Aliquota adeguato volume delle cellule (ad es., 200 ml di LPLS) in un piatto fondo rotondo da 96 pozzetti. </li><li> Centrifugare a 500 xg per 5 minuti a 4 ° C. Decantare il surnatante invertendo la piastra. </li><li> Risospendere le cellule in 90 ml di RPMI contenente il 2% FBS e una diluizione 1: 100 di CD16 anti-/ 32 (blocco FC). Incubare per 10 minuti a 4 ° C. </li><li> Aggiungere 10 ml di PBS. Centrifugare a 500 xg per 5 minuti a 4 ° C. Decantare il surnatante invertendo la piastra. </li><li> Risospendere le cellule in 250 l di PBS. Centrifugare a 500 xg per 5 minuti a 4 ° C. surnatante decantareinvertendo la piastra. </li><li> cellule Stain (opzionale) con colorante vitalità, se lo si desidera, seguendo il protocollo del produttore. </li><li> Risospendere le cellule in 100 l 1% di formalina per fissare le cellule. Incubare per 1 ora al buio a 4 ° C. </li><li> Aggiungere 200 l di PBS. Centrifugare a 500 xg per 5 minuti a 4 ° C. Decantare il surnatante invertendo la piastra. </li><li> Risospendere le cellule in 250 l di PBS. Centrifugare a 500 xg per 5 minuti a 4 ° C. Decantare il surnatante invertendo la piastra. </li><li> Risospendere le cellule in 200 l di PBS. Analizzare le cellule utilizzando un citofluorimetro. </li></ol>

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</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Vi presentiamo un protocollo per l&#39;isolamento e il flusso caratterizzazione mediante citometria di piccole-intestinale linfociti, tra cui il LPLS, IELS, e linfociti nel PP. Per chi è interessato a valutare come i cambiamenti nel microbiota influenzano la piccola-intestinale sistema immunitario, ci dettaglio i semplici passaggi coinvolti nella trasmissione orizzontale di organismi tra i topi che ospitano diverse microbiotas. Sebbene questo protocollo concentra sul piccolo intestino, la procedura è la stessa per l&#39...

Il compito principale del piccolo intestino è spesso considerata la digestione e l&#39;assorbimento dei nutrienti 1. Anche se questa funzione metabolica è chiaramente essenziale, il piccolo intestino ha un ruolo altrettanto significativo nel proteggere l&#39;host dallo sbarramento continuo di antigeni ambientali presenti all&#39;interno del lume 2. Il tratto intestinale separa il mondo esterno (ad es., Antigeni luminali) dall&#39;ambiente interno dell&#39;ospite con uno strato epiteliale che è soltanto un singolo strato di cellule di spessore. Come tale, il piccolo-intestinale sistema immunitario ha il compito arduo di bilanciare la soglia per la reattività, permettendo antigeni estranei dalla dieta e commensali microbi per immettere la mucosa con minima o nulla, la risposta immunitaria nel montare una risposta forte contro patogeni e altri antigeni &quot;nocivi&quot;. Risposte immunitarie eccessive o inappropriate a questi antigeni possono portare a malattie patologiche (ad es., Infiammazionimalattia Tory intestinali, diabete di tipo I, la sclerosi multipla) e deve essere evitato 3-6. Complessivamente, il tratto gastrointestinale è pensato per rappresentare il più grande organo immunitario del corpo, contenente più del 70% di tutte le cellule secernenti anticorpi 7. Il sistema immunitario del piccolo intestino è composto da 3 compartimenti principali - lamina propria (LP), lo strato intraepiteliale e placche di Peyer (PP) - che ogni contiene un particolare gruppo di linfociti 2. I linfociti LP (LPLS) sono principalmente cellule T TCRαβ con ~ cellule del 20% B; linfociti intraepiteliali (IELS) contengono pochissime cellule B con più cellule T TCRγδ di cellule T TCRαβ; e PP, che sono gli organi linfoidi secondari incorporati nel piccolo-intestinale muro, contengono cellule ~ 80% B. Anche se ciascuna di queste regioni anatomiche ha funzioni leggermente diverse e basi ontologiche, funzionano in ahmoda armonized per proteggere l&#39;host da insulti patogeni. Inoltre, vi è una crescente apprezzamento che il microbiota &#39;critico per lo sviluppo del sistema immunitario intestinale, con crescente riconoscimento del rapporto tra cognate microbi specifici e l&#39;ontogenesi di particolari linee cellulari 8,9. Inoltre, dato che l&#39;educazione del sistema immunitario intestinale colpisce risposte immunitarie nei siti anatomicamente distanti (ad es., L&#39;artrite, la sclerosi multipla, la polmonite), è diventato chiaro che lo sviluppo del sistema immunitario intestinale è rilevante per più processi di malattia rispetto al passato riconosciuto 10 -12. Come tale, l&#39;interesse per quantitativamente valutazione del sistema immunitario intestinale si è esteso al di là di interazioni ospite-patogeno per includere ora interazioni ospite-commensale e la patogenesi di molte malattie sistemiche come bene. Data la variabilità dei metodi attuali nellaisolamento dei linfociti intestinali, un metodo che è ottimizzato per la resa, la vitalità e la coerenza bilanciando il tempo richiesto è sempre più critica. I protocolli che coinvolgono gradienti di Percoll sono tempo e lavoro e potenzialmente più inclini a errori umani, che porta a rendimento variabile e la vitalità 13. Qui, forniamo un protocollo ottimizzato per l&#39;isolamento e la caratterizzazione dei linfociti da tutti e 3 i comparti del sistema immunitario del piccolo intestino. Inoltre, data crescente interesse alterazioni microbo indotte nel sistema immunitario mucosale, includiamo passi che possono essere utilizzati per consentire la trasmissione orizzontale di microrganismi tra i topi di valutare come questi cambiamenti influenzano quantitativamente il sistema immunitario intestinale.

<table><tbody><tr><td>Guanti sterili</td><td>Kimberly-Clark</td><td>555092</td><td></td></tr><tr><td>gabbia sterile per topi</td><td>Innovive</td><td>MS2-AD</td><td>contiene coperchio, fondo della gabbia e lettiera alfa-dri</td></tr><tr><td>Alimentatore in metallo</td><td>Innovive</td><td>M-FEED</td> Borraccia Innovive M-WB-300 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portacarte</td><td>Innovive</td><td>CRD-HLD-H</td><td></td></tr><tr><td>Roditore autoclavabile chow (NIH-31M)</td><td>Zeigler</td><td>4131207530</td><td></td></tr><tr><td>RPMI medium 1640</td><td>Gibco</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitolo (DTT)</td><td>Sigma</td><td>D5545-5G</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M EDTA (pH 8.0)</td><td>Ambion</td><td>AM9262</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>GemBio</td><td>100-510</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Invitrogen</td><td>17105-041</td><td>la concentrazione nel protocollo si basa su un livello di attività di 1,878 U/mg</td></tr><tr><td>di collagenasi, tipo II&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>17101-015</td><td>la concentrazione nel protocollo si basa su un livello di attività di 245 U/mg</td></tr><tr><td>Forbici da dissezione</td><td>Roboz</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Ago di alimentazione (18 G, lunghezza 2")</td><td>Roboz</td><td>FN-7905</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 10 ml</td><td>BD</td><td>305482</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi monouso (15 lame)</td><td>Miltex</td><td>4-415</td><td></td></tr><tr><td>Pinza curva</td><td>Roboz</td><td>RS-5211</td><td></td></tr><tr><td>Pinza dritta</td><td>Roboz</td><td>RS-5132</td><td></td></tr><tr><td>Tazze multiuso, 120 ml</td><td>VWR</td><td>89009-662</td><td></td></tr><tr><td>Barra di agitazione</td><td>VWR</td><td>58949-062</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di agitazione multiposizione, 9 posizioni</td><td>VWR</td><td>12621-048</td><td></td></tr><tr><td>Conica in acciaio inossidabile Filtro, 3 pollici</td><td>RSVP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1,5 ml Tubo</td><td>Eppendorf</td><td>0030 125.150</td><td></td></tr><tr><td>100 &mu; m Filtro cellulare</td><td>Falcon</td><td>08-771-19</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; m Filtro cellulare</td><td>Falcon</td><td>08-771-1</td><td></td></tr><tr><td>50 ml Tubo conico</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 1 ml</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Piastra a 96 pozzetti, fondo tondo</td><td>Corning</td><td>3799</td><td></td></tr><tr><td>Anti-mouse CD16/32 (blocco Fc)</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr> <tr><td>(Opzionale) Colorante di vitalità fissabile eFluor 780</td><td>eBiosciences</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>10% Formalina, tamponato neutro</td><td>Thermo Scientific</td><td>5725</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento e caratterizzazione citometria a flusso di murine piccolo intestinale linfociti

Isolation and Flow Cytometric Characterization of Murine Small Intestinal Lymphocytes

L&#39;intestino - che contengono il maggior numero di cellule immunitarie di qualsiasi organo del corpo - sono costantemente esposti ad antigeni estranei, sia microbica e dietetici. Dato una maggiore comprensione che questi antigeni luminali contribuiscono a formare la risposta immunitaria e che l&#39;istruzione di cellule immunitarie all&#39;interno dell&#39;intestino è critica per un certo numero di malattie sistemiche, c&#39;è stato un crescente interesse nel caratterizzare il sistema immunitario intestinale. Tuttavia, molti protocolli pubblicati sono arduo e richiede tempo. Presentiamo qui un protocollo semplificato per l&#39;isolamento dei linfociti dalla propria nell&#39;intestino tenue lamina strato intraepiteliale e placche di Peyer che è rapido, riproducibile e non richiede laboriose gradienti di Percoll. Sebbene il protocollo concentra sul piccolo intestino, è adatto anche per l&#39;analisi del colon. Inoltre, si segnalano alcuni aspetti che possono avere bisogno di ulteriore ottimizzazione a seconda della specifica ques scientificozione. Questo approccio si traduce in l&#39;isolamento di un gran numero di linfociti vitali che possono poi essere utilizzati per analisi di citometria di flusso o sistemi alternativi per la caratterizzazione.

Flusso citometria di sospensioni singola cella di piccole-intestinale linfociti dovrebbe produrre una popolazione discreta di cellule che hanno caratteristiche simili in avanti e scatter laterale come splenociti (Figure 1A e 1B). I linfociti possono cominciare a morire se il tessuto non viene mantenuta a 4 ° C durante le fasi iniziali della isolamento, con conseguente popolazione linfocitaria avente un forward scatter inferiore ed essere più difficile da separare da altr...

C'è un crescente interesse per la caratterizzazione quantitativa dei linfociti intestinali a causa del crescente riconoscimento che queste cellule svolgono un ruolo critico in una varietà di malattie intestinali e sistemiche. In questo protocollo, descriviamo come isolare singole popolazioni cellulari da diversi compartimenti dell'intestino tenue per la successiva caratterizzazione citofluorimetrica.

Isolamento e caratterizzazione citometria a flusso di Murine Piccolo intestinale Linfociti

The intestines &#8212; which contain the largest number of immune cells of any organ in the body &#8212; are constantly exposed to foreign antigens, both ...

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare popolazioni di singole cellule da diversi compartimenti dell'intestino tenue che possono successivamente essere utilizzate per l'analisi mediante citometria a flusso o per un metodo alternativo di caratterizzazione. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nell'immunologia della mucosa, ad esempio in che modo la microbiota influisce sullo sviluppo del sistema immunitario intestinale. I principali vantaggi di questa tecnica sono la rapidità, la riproducibilità e il fatto che non richieda gradienti laboriosi di percoll.Per iniziare questa procedura, posizionare il topo con il dorso rivolto verso il basso e spruzzare l'addome con etanolo al 70 percento; eseguire quindi una laparotomia tagliando in sequenza la cute e successivamente la fascia peritoneale lungo la linea mediana ventrale, dalla sinfisi pubica al processo xifoideo, esponendo così la cavità peritoneale. Successivamente, separare l'intestino tenue dallo stomaco recidendo lo sfintere pilorico. Rimuovere delicatamente l'intestino tenue dal peritoneo e staccare il grasso mesenterico.Per rimuovere completamente l'intestino tenue, effettuare un secondo t

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Qui, dettaglio una metodologia per l'isolamento rapido delle cellule dendritiche di topo intestinali (DCS) e macrofagi. Caratterizzazione fenotipica di DC intestinali e macrofagi viene eseguita utilizzando multi-color analisi citometrica mentre magnetica arricchimento tallone seguita dalla selezione cellulare viene utilizzato per produrre le popolazioni di elevata purezza per gli studi funzionali.

Isolamento e caratterizzazione di cellule dendritiche ei macrofagi dall&#39;intestino mouse

Descriviamo l'isolamento rapido di primarie murine di tipo II le cellule epiteliali alveolari (AECII) per selezione di citometria di flusso negativo. Questi AECII mostrano alta vitalità e purezza e sono adatte per una vasta gamma di studi funzionali e molecolari riguardanti il ​​loro ruolo in condizioni respiratorie come le malattie autoimmuni o infettive.

Flusso Isolamento citometrica di primari murini di tipo II cellule alveolari epiteliali per gli studi funzionali e molecolari

I linfociti sono i principali attori nelle risposte immunitarie adattative. Qui, presentiamo un protocollo di purificazione dei linfociti per determinare le funzioni fisiologiche delle molecole desiderate nell'attivazione dei linfociti in vitro e in vivo. Le procedure sperimentali descritte sono adatte per confrontare le capacità funzionali tra linfociti di controllo e linfociti geneticamente modificati.

L&#39;isolamento e l&#39;attivazione di linfociti murini

Questo articolo descrive spettrale citometria, un nuovo approccio per citometria di flusso che utilizza le forme di spettri di emissione per distinguere fluorocromi. Un algoritmo sostituisce compensazioni e può trattare auto-fluorescenza come parametro indipendente. Questo nuovo approccio permette la corretta analisi delle cellule isolate da organi solidi.

Analisi delle sospensioni cellulari isolate da tessuti solidi da Spectral citometria a flusso

Qui descriviamo un protocollo dettagliato per l'isolamento dei linfociti dai siti induttivi tra cui il tessuto linfoide associato all'intestino di Peyer ed i linfonodi mesenterici drenanti e i siti di effettrici tra la lamina propria e la epitelio intestinale del piccolo sistema immunitario intestinale.

Isolando i linfociti del sistema immunitario intestinale piccolo per Mouse

Qui, presentiamo un protocollo per preparare singole cellule da timo murino, pancreatico drenante linfonodi e milza per studiare ulteriormente queste cellule mediante citometria a flusso. Inoltre, questo protocollo è stato utilizzato per determinare le sottopopolazioni di cellule T regolatorie mediante citometria a flusso.

Determinazione dei sottoinsiemi di regolamentazione delle cellule T nel timo murino, pancreatico drenante linfonodi e milza mediante citometria a flusso

Descriviamo qui una semplice analisi dell'eterogeneità del compartimento delle cellule B immunitarie murine nel peritoneo, nella milza e nei tessuti del midollo osseo mediante citometria a flusso. Il protocollo può essere adattato ed esteso ad altri tessuti di topo.

Caratterizzazione citometrica a flusso dello sviluppo delle cellule B murine

Questo è un metodo per isolare le cellule linfoidi uterine da topi sia gravidi che non gravidi. Questo metodo può essere utilizzato per molteplici applicazioni a valle come la fenotipizzazione FACS, lo smistamento cellulare, i saggi funzionali, l'RNA-seq e la proteomica. Il protocollo qui dimostra come fenotipizzare le cellule linfoidi innate uterine del gruppo 1 mediante citometria a flusso.

Isolamento delle cellule linfoidi innate uterine per l'analisi mediante citometria a flusso

In questo studio, presentiamo un protocollo efficace e riproducibile per isolare le popolazioni immunitarie del sistema respiratorio murino. Forniamo anche un metodo per l'identificazione di tutte le cellule immunitarie innate e adattative che risiedono nei polmoni di topi sani, utilizzando un pannello di citometria a flusso a 9 colori.

Analisi citometrica a flusso per l'identificazione delle cellule immunitarie innate e adattative del polmone murino

Questo protocollo offre istruzioni dettagliate per stabilire organoidi murini dell'intestino tenue, isolare le cellule linfoidi innate di tipo 1 dalla lamina propria dell'intestino tenue murino e stabilire co-colture tridimensionali (3D) tra entrambi i tipi di cellule per studiare le interazioni bidirezionali tra le cellule epiteliali intestinali e le cellule linfoidi innate di tipo 1.

Co-coltura di organoidi epiteliali murini dell'intestino tenue con cellule linfoidi innate

Impara l'isolamento e la caratterizzazione citometrica dei linfociti intestinali murini. Questo metodo rapido e riproducibile facilita lo studio dell'immunità mucosa e del ruolo del microbiota nel sistema immunitario intestinale.

Isolamento e caratterizzazione citometria a flusso di Murine Piccolo intestinale Linfociti

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