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DOI: 10.3791/55778-v
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Una metodica di spettrometria di massa tandem (LC-MS / MS) cromatografica a liquido selettivo e sensibile, accoppiata con un'estrazione efficiente di fase solida su una micropiastra a 96 pozzetti di MCX, è stata sviluppata per la misura della libera 3-nitrotirosina ( 3-NT) in urine umane con un elevato throughput, che è adatto per applicazioni cliniche.
L'obiettivo generale di questa estrazione miniaturizzata in fase solida combinata con il test LC-MS/MS è quello di quantificare con precisione la 3-nitrotirosina libera nelle urine umane per applicazioni cliniche. La 3-nitrotirosina libera aiuta nelle rese e un biomarcatore per lo stress ossidativo. Tuttavia, rimarrà una sfida particolare quantificare con precisione la 3-nitrotirosina nelle emergenze biologiche per applicazioni cliniche a causa dell'insufficiente sensibilità, della selettività e delle ingombranti preparazioni dei campioni.
Questa tecnica che incorpora un'efficace estrazione in fase solida in un'interazione LC-MS/MS altamente sensibile consente una determinazione rapida, specifica e accurata di bassi livelli di 3-nitrotirosina endogena nelle urine umane senza la necessità di costituzione e LC bidimensionale. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sull'indagine sullo stress ossidativo, può essere applicato anche ad altre condizioni patologiche come disturbi infiammatori complessi e neurodegenerativi. Le implicazioni di questa tecnica potrebbero essere estese al monitoraggio dell'efficacia del trattamento antiossidante perché il livello di 3-nitrotirosina può essere ridotto dagli antiossidanti. Per iniziare questa procedura, vorticare precedentemente preparato e scongelato campioni di urina, standard e campioni di controllo qualità.
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