Name: Una fase di time-lapse, privo di etichetta, quantitativa Imaging Studio delle cellule tumorali umane dormienti e attivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Scopri l'imaging quantitativo di fase time-lapse per caratterizzare fenotipi angiogenici e non angiogenici di cellule di osteosarcoma umano. Questo metodo integrato analizza morfologia, proliferazione e motilità cellulare.

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Gli autori riconoscono con gratitudine il sostegno della Breast Cancer Research Foundation e Advanced Medical Research Foundation.

Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati da ospedale Comitato bambini di Boston biosicurezza istituzionale.
1. cella preparazione
<ol><li>
Lo scongelamento KHOS-A e cellule -N
	<ol>
<li>Riscaldare il terreno di coltura, cioè, Dulbecco per volta supplementato Eagle con 10% di siero fetale di vitello (vol/vol) (FBS) e 1% (vol/vol) penicillina/streptomicina.</li>
		<li>Prendere le fiale criogeniche delle cellule dal serbatoio di azoto liquido, il fondo delle fiale non immergere in acqua calda a bagnomaria a 37 ° C e agitare delicatamente i flaconi criogenici per accelerare il processo di scongelamento. Tenere il coperchio delle fiale criogeniche dal contatto con acqua, per evitare contaminazioni. Non appena le cellule vengono scongelate, sterilizzare il flaconcino criogenico spruzzando soluzione di etanolo 70% e asciugandosi il flaconcino.</li>
		<li>In una cappa a flusso laminare, aspirare immediatamente la sospensione cellulare dal flaconcino criogenico e delicatamente sospendere in terreno di coltura 10ml riscaldato (descritto al punto 1.1.1). Centrifugare le sospensioni delle cellule a circa 200 x g per 5-7 min.</li>
		<li>Risospendere il pellet cellulare con terreno di coltura 10ml riscaldato e trasferire in un matraccio T75. Pipettare delicatamente più volte a sospendere le cellule in modo uniforme utilizzando una pipetta da 10 mL.</li>
		<li>Collocare la beuta in un incubatore a 37 ° C con 5% (vol/vol) CO2 e atmosfera umidificata. Consentire alle cellule di fissare per almeno 12 ore.</li>
		<li>Incubare le cellule per circa 3-7 giorni fino a 80-100% confluenti. Cambiare il terreno di coltura ogni 2-3 giorni.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Spaccare KHOS-A e cellule -N
	<ol>
<li>Rimuovere il supporto di cultura dal pallone.</li>
		<li>Lavare le cellule con 5 mL di PBS sterile (1x) senza calcio e magnesio, per rimuovere le cellule non aderenti o frazione.</li>
		<li>Aggiungere 1 mL di soluzione di 0.05% tripsina-EDTA nel pallone, e agitare brevemente il pallone per garantire che la tripsina-EDTA è disperso in modo uniforme.</li>
		<li>Incubare la beuta per 2-3 min in un incubatore a 37 ° C o 3-5 min a temperatura ambiente. Controllare le cellule con un microscopio a circa 400 ingrandimenti per assicurarsi che le celle sono arrotondate e staccate.</li>
		<li>Una volta che le cellule sono staccate, aggiungere 10 mL terreno di coltura e pipettare delicatamente il mezzo su e giù più volte per spezzare aggregati cellulari in sospensione singola cella utilizzando una pipetta da 10 mL.</li>
		<li>Contare le celle utilizzando un contatore di cellule. La sospensione cellulare del seme in nuovo T75 matracci a una densità di 2 × 106 cellule o un rapporto di 1:4.</li>
		<li>Consentire alle cellule di crescere alla confluenza di 80-100% prima della semina per l'esperimento QPI.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Seeding KHOS-A e -N celle per QPI
	<ol>
<li>Seme KHOS-A e -N cellule in piastre da 6 pozzetti alla densità di 50.000-300.000 cellule/pozzetto con 5 mL di coltura dopo il conteggio con un contatore di cellule. Nota: La densità di semina dipende il tasso di proliferazione delle cellule e il formazione immagine periodo di tempo al fine di avere < 100% confluenza durante acquisizione di imaging.</li>
		<li>Incubare le cellule per almeno 12 ore consentire l'attaccamento.</li>
		<li>Modificare il mezzo con media fresco prima di condurre QPI.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. QPI acquisizione
<ol><li>
Vetrini coprioggetto istituito
	<ol>
<li>Pulire il vetrino coprioggetto risciacquando più volte con acqua deionizzata e sterilizzare con soluzione di etanolo di 75% per immersione per 15 minuti, mettere il vetrino coprioggetto in una cappa a flusso laminare sterile ad asciugare.</li>
		<li>Posizionare delicatamente il vetrino coprioggetto sul piatto 6-pozzetti per evitare bolle ovvie. Verificare che il fondo di vetrini coprioggetto è immerso nel mezzo di coltura (minimo 5 mL/pozzetto).</li>
		<li>Posizionare la piastra in incubatrice (37 ° C, 5% CO2e atmosfera umidificata) stabilizzare per almeno 15 min. Se la nebbia si forma sui vetrini coprioggetto, utilizzare un tampone di cotone sterile per pulirlo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cellule di imaging con un microscopio
	<ol>
<li>Aprire il software per inizializzare il sistema, tra cui autocalibrazione del tempo di esposizione, il contrasto di modello e rumore di ologramma. Assicurarsi che i valori siano accettabili (mostrato nella fascia verde o giallo).</li>
		<li>Posizionare la piastra a 6 pozzetti sul palco del microscopio QPI.</li>
		<li>Fare clic su "Live Capture" e selezionare "Manuale" a "Fuoco Software." Grossolanamente a fuoco le immagini di fase delle cellule regolando la distanza di lavoro "Impostazione del microscopio" per ottenere contorni per le celle in immagini di fase. Modificare in "Automatico" a "Fuoco Software."</li>
		<li>Fai clic su "Nuovo esperimento" per creare un nuovo esperimento. Iniziare con la selezione delle posizioni di acquisizione immagine utilizzando il mouse o i tasti freccia sul tastierino numerico. Fare clic su "Memorizza" dopo ogni selezione. Normalmente 3-5 posizioni per ciascun campione sono selezionate.</li>
		<li>Impostare gli intervalli di imaging e il periodo di tempo nella sezione "Timelapse". Nota: Per tenere traccia di cellule tumorali chiaramente, gli intervalli devono essere inferiore a 5 min 48 ore è impostato come periodo di tempo per la combinazione di analisi QPI.</li>
		<li>Iniziare l'esperimento facendo clic su "Cattura", che verrà automaticamente a fuoco e acquisire le immagini a intervalli di tempo di impostazione.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. analisi dei dati
<ol><li>
Analisi della morfologia di cellule
	<ol>
<li>Fare clic su "Identificare cellule." Regolare l'impostazione numerica per "Soglia di sfondo" in modo che aree di celle sono separati anche dal rumore di fondo. Regolare il numero di impostazione per "Dimensioni dell'oggetto" per assicurarsi che ogni cellula ha un nucleo. Mantenere i parametri coerenti per i campioni che devono essere confrontati, come possono interessare le misure finali di area e volume. Se necessario, modificare manualmente segmenti di cella utilizzando "Modifiche manuali,".</li>
		<li>Utilizzare la funzione "Analisi dati" nel software per analizzare le cellule. Avviare una nuova analisi di dati facendo clic su "Nuova analisi". Trascinare le immagini selezionate in "Fotogrammi sorgente" scheda e cella morfologia parametri tra cui area di cella (µm2), spessore ottico (µm) e volume (µm3) per ogni singola cella. Scegliere scatter plot o istogramma modalità ed esportazione dati come tabelle o figure.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analisi di proliferazione delle cellule
	<ol>
<li>Selezionare almeno 5 immagini per i diversi momenti di interesse (ad es., iniziale, 12h, 24h, 36h e 48 h). Numeri di record delle cellule che sono forniti dal software.</li>
		<li>Per stimare il tempo di raddoppiamento, tracciare i numeri delle cellule dopo normalizzazione con i numeri iniziali e in forma con curve di crescita esponenziale.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Analisi del movimento cellulare
	<ol>
<li>Utilizzare la funzione "Track cellule" nel software. Fare clic su "Nuova analisi" per avviare una nuova analisi di dati. Serie di trascinamento di immagini per un periodo di tempo selezionato (ad esempio, 4 h dopo 24 ore di incubazione) nella scheda "Fotogrammi sorgente" scegliere casualmente 10-30 celle facendo clic su celle sotto la modalità di selezione "Aggiungere celle". Escludere le cellule ai bordi e coloro che si spostano fuori del campo di vista.</li>
		<li>Controllare attentamente il tracciamento della serie di immagini. Nel caso in cui il sistema perde traccia di una cella o tracce nella cella sbagliata, regolare manualmente la cella di rilevamento facendo clic su "Identificare" per identificare le celle o facendo clic su "Modifica posizione" sotto la modalità "Select" per modificare la posizione della cella.</li>
		<li>Scegliete rosa trama delle traiettorie delle cellule nel "Movimento di trama" e trama per gli altri parametri dovute al movimento in "Caratteristiche di trama," come velocità di motilità (µm/h), motilità (µm), migrazione (µm) e l'immediatezza di migrazione. Esportare i dati come tabelle o figure.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+cancer%2C+vascular%2C+rheumatoid+and+other+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease.</a> Nature Medicine. 1 (1), 27-31 (1995).</li>
<li>Hanahan, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+and+emerging+mechanisms+of+the+angiogenic+switch+during+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis.</a> Cell. 86 (3), 353-364 (1996).</li>
<li>Harper, J., Moses, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+tumor+angiogenesis%3A+mechanisms+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22EXS%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of tumor angiogenesis: mechanisms and therapeutic implications.</a> EXS. (96), 223-268 (2006).</li>
<li>Naumov, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+human+tumor+dormancy%3A+an+angiogenic+switch+from+the+nonangiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">A model of human tumor dormancy: an angiogenic switch from the nonangiogenic phenotype.</a> Journal of the National Cancer Institute. 98 (5), 316-325 (2006).</li>
<li>Fang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+metalloproteinase-2+is+required+for+the+switch+to+the+angiogenic+phenotype+in+a+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Matrix metalloproteinase-2 is required for the switch to the angiogenic phenotype in a tumor model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (8), 3884-3889 (2000).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+switch+of+dormant+tumors+to+fast-growing+angiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Transcriptional switch of dormant tumors to fast-growing angiogenic phenotype.</a> Cancer Research. 69 (3), 836-844 (2009).</li>
<li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+signature+for+angiogenic+and+nonangiogenic+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Gene expression signature for angiogenic and nonangiogenic non-small-cell lung cancer.</a> Oncogene. 24 (7), 1212-1219 (2005).</li>
<li>Harper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+vascular+endothelial+growth+factor+expression+by+the+zinc+finger+transcription+factor+ZNF24%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Repression of vascular endothelial growth factor expression by the zinc finger transcription factor ZNF24.</a> Cancer Research. 67 (18), 8736-8741 (2007).</li>
<li>Jia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+repression+of+VEGF+by+ZNF24%3A+mechanistic+studies+and+vascular+consequences+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Transcriptional repression of VEGF by ZNF24: mechanistic studies and vascular consequences in vivo.</a> Blood. 121 (4), 707-715 (2013).</li>
<li>Jia, D., Huang, L., Bischoff, J., Moses, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endogenous+zinc+finger+transcription+factor%2C+ZNF24%2C+modulates+the+angiogenic+potential+of+human+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The endogenous zinc finger transcription factor, ZNF24, modulates the angiogenic potential of human microvascular endothelial cells.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 29 (4), 1371-1382 (2015).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+dormancy+of+human+liposarcoma+is+associated+with+impaired+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Prolonged dormancy of human liposarcoma is associated with impaired tumor angiogenesis.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 20 (7), 947-949 (2006).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+micro+RNAs+governing+the+switch+of+dormant+tumors+to+the+fast-growing+angiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Consensus micro RNAs governing the switch of dormant tumors to the fast-growing angiogenic phenotype.</a> PloS One. 7 (8), e44001(2012).</li>
<li>Satchi-Fainaro, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+glioblastoma+cells+generating+dormant+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of glioblastoma cells generating dormant tumors.</a> PloS One. 7 (9), e44395(2012).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+changes+induced+by+the+tumor+dormancy-associated+microRNA-190%5BTitle%5D)+AND+%22Transcription%22%5BJournal%5D)">Transcriptional changes induced by the tumor dormancy-associated microRNA-190.</a> Transcription. 4 (4), 177-191 (2013).</li>
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<li>Folkman, J., Watson, K., Ingber, D., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+angiogenesis+during+the+transition+from+hyperplasia+to+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Induction of angiogenesis during the transition from hyperplasia to neoplasia.</a> Nature. 339 (6219), 58-61 (1989).</li>
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<li>Lee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Phase+Imaging+Techniques+for+the+Study+of+Cell+Pathophysiology%3A+From+Principles+to+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors%22%5BJournal%5D)">Quantitative Phase Imaging Techniques for the Study of Cell Pathophysiology: From Principles to Applications.</a> Sensors. 13 (4), 4170-4191 (2013).</li>
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<li>Marrison, J., Räty, L., Marriott, P., O'Toole, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ptychography--a+label+free%2C+high-contrast+imaging+technique+for+live+cells+using+quantitative+phase+information%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Ptychography--a label free, high-contrast imaging technique for live cells using quantitative phase information.</a> Scientific Reports. 3, 2369(2013).</li>
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<li>Park, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+cell+surface+area+and+deformability+of+individual+human+red+blood+cells+over+blood+storage+using+quantitative+phase+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Measuring cell surface area and deformability of individual human red blood cells over blood storage using quantitative phase imaging.</a> Scientific Reports. 6, 34257(2016).</li>
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</ol>

Conflitti di interesse non dichiarati.

In questo studio, descriviamo un in vitro, non invasivo e privo di etichetta metodo usando QPI per caratterizzare quantitativamente i fenotipi angiogenici e non-angiogeniche delle cellule di osteosarcoma umano. Più parametri cellulari sono stati analizzati simultaneamente da questo metodo integrato, ad alta produttività, tra cui area di cella, spessore della cella, volume delle cellule, il tasso di proliferazione, raddoppiando il tempo, immediatezza di migrazione, velocità di motilità, migrazione e motilità....

Uno dei primi punti di controllo nello sviluppo e nella progressione di un tumore solido è l'acquisizione del fenotipo angiogenico, un marchio di garanzia di cancro. Questa progressione comporta tutta una serie di processi biochimici e molecolari1,2,3. Una sfida tecnica nello studio di questo passaggio chiave nella progressione del tumore è la mancanza di strumenti per continuamente e quantitativamente caratterizzare e distinguere tra fenotipi angiogenici e non-angiogeniche delle cellule tumorali dal vivo in modo imparziale. Le analisi tradizionali utilizzate per indagare i comportamenti cellulari delle cellule angiogenici e non-angiogenici solitamente richiedono strumenti e reagenti costosi, ad esempio, proliferazione e migrazione di cellule dosaggi4,5, 6,7,8,9,10,11,12,13,14 o complementari in vivo valutazioni4,5,6,8,15,16, come pure che richiedono ad alta intensità e significativa esperienza consumo di tempo e manodopera.
Recentemente, la fase quantitativa imaging (QPI) è emerso come una nuova tecnica che consente la valutazione di time-lapse e privo di etichettatura di una varietà di cellula morfologia e comportamento parametri17,18,19, 20 , 21 , 22. a differenza di microscopia ottica convenzionale, QPI quantifica variazioni di pixel per pixel di sfasamento dopo luce passa attraverso un oggetto ottico e ricostruisce un testamento olografo con spessore ottico convertito e volume, consentendo in tal modo la diretta analisi di cellule vive e le seguenti caratteristiche: (1) quantitativa imaging, imaging (2) non-invasivo e time-lapse, imaging (3) privo di etichetta e (4) simultanea multi-parametro imaging. Queste caratteristiche rendono QPI un potente strumento per valutare e comprendere i processi patologici a livello cellulare.
In un recente studio, abbiamo utilizzato QPI per quantitativamente caratterizzare e distinguere tra angiogenici KHOS-A e non-angiogenici KHOS-N fenotipi di cellule di osteosarcoma umano in maniera sistematica e quantitativa, combinando analisi della morfologia delle cellule, proliferazione e la motilità23. Utilizzando software di analisi di immagine, un pannello di cella morfologica e comportamento parametri quantitativamente sono stati confrontati fra le cellule di osteosarcoma umano angiogenici e non-angiogenici e sono state identificate cinque differenze di caratteristiche tra questi due fenotipi. Questo approccio novello fornisce una piattaforma integrata e quantitativa per valutare una gamma di caratteristiche cellulari biologicamente rilevanti.

<table><tbody><tr><td>Pallone T75</td><td>Corning, NY, USA</td><td>353136</td><td></td></tr><tr><td>piastre a 6 pozzetti&nbsp;</td><td>Corning, NY, Stati Uniti</td><td>3506</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s modificato Eagle medium (DMEM)</td><td>Thermo Fisher Scientific, MA, USA</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)&nbsp;</td><td>Atlanta Biologicals, GA, USA</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina Streptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific, MA, USA</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific, MA, USA</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Z1 Coulter counter Beckman</td><td>Coulter, IN, USA</td><td>Z1&nbsp;</td><td></td></tr><tr>Imaging olografico a fase <td>HoloMonitor M4</td><td>Phi AB, Lund, Svezia</td><td>Microscopio</td><td>M4</td></tr><tr><td>Imaging olografico a fase ololidea Phi AB, Lund, Svezia</td><td>PHI 8020</td><td></td><td></td></tr><tr>Imaging olografico a fase<td>HStudioM4</td><td>Phi AB, Lund, Svezia</td><td>HStudioM4</td><td>Software</td></tr></tbody></table>

una fase di time-lapse, privo di etichetta, quantitativa imaging studio delle cellule tumorali umane dormienti e attivo

A Time-lapse, Label-free, Quantitative Phase Imaging Study of Dormant and Active Human Cancer Cells

L'acquisizione del fenotipo angiogenico è una componente essenziale della fuga dalla dormienza del tumore. Anche se parecchi saggi classici in vitro (ad esempio, proliferazione, migrazione e altri) e in vivo modelli sono stati sviluppati per studiare e caratterizzare fenotipi cellulari angiogenici e non-angiogenici, questi metodi sono tempo lavoro intensivo e spesso richiedono costosi reagenti e strumenti, nonché significative esperienze. In un recente studio, abbiamo usato una romanzo fase quantitativa (QPI) tecnica di imaging per condurre time-lapse e privo di etichettatura caratterizzazioni di cellule umane di osteosarcoma KHOS angiogenici e non-angiogenici. Un pannello dei parametri cellulari, tra cui la morfologia delle cellule, la proliferazione e la motilità, sono stati misurati quantitativamente e analizzati usando QPI. Questo romanzo e l'approccio quantitativo offre l'opportunità di continuamente e in modo non invasivo di studio pertinenti processi cellulari, comportamenti e le caratteristiche delle cellule tumorali e altri tipi di cellule in modo semplice e integrato. Questo rapporto descrive il nostro protocollo sperimentale, tra cui la preparazione delle cellule, QPI acquisizione e analisi dei dati.

Figura 1 raffigura una caratterizzazione di morfologia tipica delle cellule. Immagini sono presentate come olografia (Figura 1A-B) e immagini 2D (Figura 1-D). Spessori di cellula ottica (calcolati l'indice di rifrazione e la lunghezza del cammino ottico) vengono quantificati tramite linea profilo o una misura di tutta la cella. Dispersione della zona e spessore di KH...

Fenotipi cellulari tumorali dormienti e attivi sono stati caratterizzati usando la formazione immagine fase quantitativa. Analisi di proliferazione, la migrazione e la morfologia delle cellule sono state integrate e analizzate in un metodo semplice.

Una fase di time-lapse, privo di etichetta, quantitativa Imaging Studio delle cellule tumorali umane dormienti e attivo

The acquisition of the angiogenic phenotype is an essential component of the escape from tumor dormancy. Although several classic in vitro assays (e.g., ...

L'obiettivo generale di questo esperimento è quello di caratterizzare quantitativamente i fenotipi angiogenici e non angiogenici delle cellule di osteosarcoma umano in modo sistematico combinando analisi della morfologia, della proliferazione e della motilità cellulare. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave per quanto riguarda l'insediamento e la progressione del cancro umano. In particolare, la fuga dalla dormienza tumorale e l'interruttore endogeno.Il vantaggio principale di questa tecnica è che i parametri multicellulari possono essere analizzati simultaneamente con questo metodo integrato ad alta diffusione. Ciò include l'area cellulare, lo spessore cellulare, il volume cellulare, il tasso di proliferazione, il tempo di raddoppio, la velocità di motilità, la migrazione e la motilità. Per iniziare, preriscalda il terreno di coltura a 37 gradi Celsius a bagnomaria.Quindi rimuovere le fiale criogeniche di cellule di osteosarcoma umano angiogeniche e non angiogeniche dal serbatoio di azoto liquido. Immergere il fondo delle fiale in un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius e agitare delicatamente le fiale criogeniche per accelerare il processo di scongelamento. Non appe

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Questo video dimostra l'identificazione senza marcatura della morfologia e della biochimica dei linfociti attraverso l'imaging di fase quantitativa 3D. Questa tecnica consente un'analisi approfondita dei linfociti, scoprendo le loro strutture e proprietà interne senza la necessità di procedure di marcatura.

Imaging di fase quantitativo tridimensionale per la caratterizzazione di sottotipi di linfociti

Fonte: Parker, J. J., et al. Un modello di coltura a fette organotipiche di glioblastoma umano per lo studio della migrazione delle cellule tumorali e degli effetti specifici del paziente dei farmaci anti-invasivi. J. Vis. Exp. (2017)Questo video mostra l'imaging di fette di tessuto di glioblastoma che esprimono la proteina fluorescente verde (GFP) tramite microscopia confocale. Le immagini ad alta risoluzione vengono acquisite a intervalli coerenti per tracciare il movimento e la direzione...

Imaging della migrazione delle cellule tumorali nel tessuto del glioblastoma mediante microscopia confocale a scansione time-lapse

Time-lapse imaging viene utilizzato per valutare il comportamento di primarie preneoplastiche cellule epiteliali mammarie derivate da modelli murini geneticamente modificati di rischio di cancro al seno per determinare se ci sono correlazioni tra i parametri specifici di comportamento e distinte lesioni genetiche.

Time-lapse imaging di primaria preneoplastiche cellule epiteliali mammarie Derivato da modelli murini geneticamente modificati di cancro al seno

Qui, descriviamo un metodo di microscopia time-lapse a lungo termine per tracciare longitudinalmente singole cellule in risposta a terapie antitumorali.

Attraverso lo specchio: Time-lapse Microscopia e longitudinale monitoraggio di singole cellule allo Studio Therapeutics anti-cancro

Questo protocollo descrive l'uso della microscopia multiphoton effettuare prolungato time-lapse imaging di interazioni multicellulari in tempo reale, in vivo a risoluzione singola cellula.

Esteso Time-lapse Imaging intravitale del Real-time multicellulare Dynamics nel microambiente tumorale

Descriviamo un protocollo per l'identificazione di sottotipi del linfocita usando formazione immagine fase quantitativa e un algoritmo di apprendimento automatico privo di etichetta. Misurazioni dell'indice di rifrazione 3D tomogrammi dei linfociti presentano 3D informazioni morfologiche e biochimiche per le singole celle, che viene quindi analizzati con un algoritmo di apprendimento automatico per l'identificazione di tipi delle cellule.

Identificazione dei sottotipi del linfocita usando la formazione immagine tridimensionale fase quantitativa privo di etichetta e Machine Learning

In questo studio è stata esaminata l'attività fagocitica dei macrofagi contro le cellule tumorali, in particolare le cellule carcinoma mammario dei topi da 4T1. Il modello di cocoltura a cellule vive è stato stabilito e osservato utilizzando una combinazione di microscopia a contrasto di interferenza fluorescente e differenziale. Questa valutazione è stata immaginata utilizzando un software di imaging per sviluppare video time-lapse multipunto.

Time-Lapse 2D Imaging dell'attività fagocitica in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

Qui presentiamo un protocollo per studiare il tasso di inizio della morte cellulare programmata mediante imaging continuo delle foglie inoculate dopo l'induzione della morte cellulare.

Studiare l'inizio della morte cellulare utilizzando un microscopio digitale

Qui, forniamo un metodo per l'analisi dell'imaging di cellule vive che può essere utilizzato per tracciare manualmente i lignaggi dei cheratinociti di passaggio 0 e che consente la raccolta di metriche di proliferazione, tra cui il destino della divisione cellulare e la durata del ciclo cellulare.

Imaging di cellule vive con fotografia time lapse per studiare la cinetica di proliferazione dei cheratinociti epidermici

Questo protocollo presenta un approccio multimodale che combina la spettroscopia Raman e la microscopia di fase tomografica per la fenotipizzazione senza marcatura e non invasiva di cellule viventi di carcinoma mammario umano. Include una pipeline di analisi facile da usare e priva di pregiudizi umani per un'analisi morfo-chimica rapida e quantitativa, fornendo informazioni molecolari e strutturali dettagliate con applicazioni nella ricerca sul cancro e nella biologia cellulare.

Un framework di imaging multimodale per far progredire la fenotipizzazione di cellule viventi di cancro al seno senza etichetta

Questo protocollo descrive un flusso di lavoro basato su tomografia a diffrazione ottica senza etichette per l'imaging in tempo reale e l'analisi quantitativa della morfodinamica dei macrofagi. Il metodo consente un monitoraggio continuo della morfologia e della migrazione delle singole cellule, fornendo misurazioni risolte nel tempo dell'area proiettata, del perimetro e della velocità media di migrazione durante l'imaging a lungo termine delle cellule vive.

Imaging in tempo reale senza etichettatura e analisi quantitativa della morfodinamica dei macrofagi utilizzando la tomografia a diffrazione ottica

Scopri l'imaging quantitativo di fase time-lapse per caratterizzare fenotipi angiogenici e non angiogenici di cellule di osteosarcoma umano. Questo metodo integrato analizza morfologia, proliferazione e motilità cellulare.

Una fase di time-lapse, privo di etichetta, quantitativa Imaging Studio delle cellule tumorali umane dormienti e attivo

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