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Proteomica di Top-down su larga scala usando la spettrometria totale in Tandem elettroforesi capi...
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JoVE Journal Chemistry
Large-scale Top-down Proteomics Using Capillary Zone Electrophoresis Tandem Mass Spectrometry

Proteomica di Top-down su larga scala usando la spettrometria totale in Tandem elettroforesi capillare zona

Full Text
10,165 Views
10:05 min
October 24, 2018

DOI: 10.3791/58644-v

Elijah N. McCool*1, Rachele Lubeckyj*1, Xiaojing Shen1, Qiang Kou2, Xiaowen Liu2,3, Liangliang Sun1

1Department of Chemistry,Michigan State University, 2Department of BioHealth Informatics,Indiana University-Purdue University Indianapolis, 3Center for Computational Biology and Bioinformatics,Indiana University School of Medicine

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Un protocollo dettagliato è descritto per la separazione, identificazione e caratterizzazione di proteoforms nei campioni della proteina mediante capillare zonale elettroforesi-electrospray ionizzazione-spettrometria di massa (CZE-ESI-MS/MS). Il protocollo può essere utilizzato per la caratterizzazione ad alta risoluzione di proteoforms nei campioni della proteina semplice e l'identificazione su grande scala di proteoforms in campioni complessi proteoma.

Questo metodo può aiutare a migliorare la caratterizzazione su larga scala e ad alta risoluzione delle isoforme proteiche e delle modifiche post-trascizionali delle proteine nelle cellule. Il principale vantaggio di questa tecnica è che la spettrometria di massa dell'elettroforesi a zona capillare offre una separazione altamente efficiente e un rilevamento altamente sensibile di proteine intatte. Per pre-trattare il capillare, asciugarlo con gas azoto a 10 psi per almeno 12 ore.

Quindi, riempire il capillare con il 50% volume per volume di metacrilato di 3-propile in metanolo utilizzando una pompa per siringhe. Sigillare entrambe le estremità del capillare con gomma silicea. Dopo aver incubato a temperatura ambiente per almeno 24 ore, continuare con un rivestimento lineare in poliacrilammide sulla parete interna del capillare di separazione, come descritto nel protocollo di testo.

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Chimica problema 140 proteomica Top-down l'elettroforesi capillare zonale ionizzazione electrospray spettrometria di massa tandem proteoform Escherichia coli

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