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DOI: 10.3791/65259-v
Tiffany M. Richardson*1, Yasminye D. Pettway*1, John T. Walker1, Heather A. Nelson2, Matthew Ishahak3, Gregory Poffenberger2, Radhika Aramandla2, Conrad Reihsmann2, Ashutosh Agarwal3, Alvin C. Powers1,2,4, Marcela Brissova2
1Department of Molecular Physiology and Biophysics,Vanderbilt University School of Medicine, 2Division of Diabetes, Endocrinology and Metabolism, Department of Medicine,Vanderbilt University Medical Center, 3Department of Biomedical Engineering,University of Miami, 4VA Tennessee Valley Healthcare System
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study addresses beta cell dysfunction and islet abnormalities in diabetes, utilizing a pseudoislet model system for synchronous acquisition of cellular signaling and hormone secretion. The method employs adenoviral delivery of a cAMP biosensor and a microperifusion system to enable dynamic analysis of insulin and glucagon responses.
Questo protocollo descrive un metodo per l'acquisizione sincrona e la co-registrazione di eventi di segnalazione intracellulare e la secrezione di insulina e glucagone da parte di pseudoisole umane primarie utilizzando la somministrazione adenovirale di un biosensore ciclico di adenosina monofosfato (cAMP), un rivelatore di differenza di cAMP in situ (cADDis) e un sistema di microperifusione.
Il nostro laboratorio sta lavorando per comprendere, prevenire e invertire la disfunzione delle cellule beta e altre anomalie palpebrali nel diabete di tipo uno e di tipo due. I nostri studi si concentrano sulla patogenesi del diabete umano integrando studi sulla biologia del pancreas e delle palpebre umane e sulla salute e malattia. Gli occhielli umani sono strutture sferiche 3D e l'accesso alle cellule attraverso l'intero occhiello presenta alcune sfide sperimentali.
Ad esempio, quando si cerca di introdurre biosensori per comprendere la segnalazione delle cellule oculari, il nostro protocollo per le pseudo palpebre supera questa sfida eseguendo manipolazioni genetiche nello stato di singola cellula e aggregando queste cellule oculari umane trasdotte in pseudo palpebre per gli studi a valle. Il nostro sistema di pseudo palpebre ci consente di esprimere i biosensori in tutto l'occhiello, piuttosto che solo sulla superficie palpebrale. In combinazione con il nostro sistema di imaging di cellule vive e microperfusione, siamo in grado di misurare e co-registrare i processi intracellulari dinamici con la secrezione ormonale a valle.
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