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DOI: 10.3791/65530-v
Ines Cherkaoui1, Qian Du2, Dieter Egli2, Shivani Misra1,3, Guy A. Rutter1,4,5
1Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Faculty of Medicine,Cell Biology and Functional Genomics, 2Departments of Pediatrics, Naomi Berrie Diabetes Center, Obstetrics and Gynecology, Columbia Stem Cell Initiative, Columbia University Irving Medical Center,Columbia University, 3Department of Diabetes,Imperial College Healthcare NHS Trust, 4Faculté de Médicine,Université de Montréal, 5Lee Kong Chian Imperial Medical School,Nanyang Technological University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for the directed differentiation of human pluripotent stem cells into insulin-producing beta-cell like cells. It emphasizes the importance of optimal culture conditions and clearly defined stages in achieving functional beta cells that can secrete insulin in response to glucose.
Questo articolo presenta un protocollo per la differenziazione diretta e l'analisi funzionale di cellule simili a cellule β. Descriviamo le condizioni e i passaggi di coltura ottimali per le cellule staminali pluripotenti umane prima di generare cellule pancreatiche produttrici di insulina. La differenziazione a sei stadi progredisce dalla formazione definitiva dell'endoderma alle cellule funzionali simili a cellule β che secernono insulina in risposta al glucosio.
Raggiungere un'efficienza elevata e costante nel processo di differenziazione per la conversione delle cellule staminali pluripotenti in cellule beta umane è una sfida notevole. Questa sfida è influenzata dalla precisione e dalla coerenza con cui lo sperimentatore segue il protocollo. Inoltre, la quantità di cellule beta ottenute in ogni esperimento è piuttosto variabile, il che può comportare una riduzione della funzione delle cellule beta in più esperimenti.
Nel contesto della ricerca sulle cellule beta ad alto contenuto di leptina nel diabete, la disponibilità di donatori di occhielli da cadavere è piuttosto limitata. Di conseguenza, l'uso di cellule beta differenziate da cellule staminali offre un apporto illimitato e abbondante di cellule secernenti insulina. La differenziazione delle cellule beta è un progresso fondamentale nel nostro campo, che offre numerosi vantaggi.
Ci permette di esplorare lo sviluppo e la funzione delle cellule beta, portando a una comprensione più profonda delle cause del diabete e della disfunzione delle cellule beta. Miriamo a utilizzare questa tecnica per la nostra ricerca incentrata sulla genetica del diabete. Il nostro obiettivo primario è quello di concentrarci sulla mutazione di alcuni geni che possono influenzare le cellule beta e la funzione degli occhielli.
Quindi questo protocollo faciliterà l'accesso all'occhiello umano derivato da cellule staminali pre-potenti con mutazioni di interesse.
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