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Analisi della formazione di complessi proteici a concentrazioni micromolari mediante accoppiament...
Analisi della formazione di complessi proteici a concentrazioni micromolari mediante accoppiament...
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Biochemistry
This content is Free Access.
JoVE Journal Biochemistry
Analysis of Protein Complex Formation at Micromolar Concentrations by Coupling Microfluidics with Mass Photometry

Analisi della formazione di complessi proteici a concentrazioni micromolari mediante accoppiamento di microfluidica con fotometria di massa

Full Text
2,987 Views
06:39 min
January 26, 2024

DOI: 10.3791/65772-v

Myndert Claasen1, Zornitsa Kofinova1, Matteo Contino2, Weston B. Struwe3,4

1Refeyn Ltd., 2Adaptix Ltd., 3Physical and Theoretical Chemistry Laboratory, Department of Chemistry,University of Oxford, 4The Kavli Institute for Nanoscience Discovery,University of Oxford

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Questo protocollo combina la fotometria di massa con un nuovo sistema microfluidico per studiare le interazioni proteina-proteina a bassa affinità. Questo approccio si basa sulla rapida diluizione di complessi altamente concentrati in soluzione, che consente misurazioni a bassa affinità e amplia l'applicabilità della fotometria di massa.

Questo protocollo dimostra un modo completamente nuovo di analizzare i complessi proteici a bassa affinità. Consente ai ricercatori di rilevare e caratterizzare alcune interazioni proteiche anche quando sono deboli o transitorie, cosa che prima era generalmente molto difficile o addirittura impossibile. Le interazioni proteiche sono cruciali per la funzione cellulare, ma rilevarle e misurarle può essere difficile.

La fotometria di massa è un ottimo strumento per quantificare la formazione di complessi proteici, ma ha dei limiti con i campioni diluiti. Stiamo risolvendo questo problema con MassFluidix. Il divario di ricerca che stiamo affrontando è il modo in cui gli scienziati possono caratterizzare in modo affidabile le interazioni a bassa affinità tra proteine in soluzione.

I vantaggi del nostro approccio sono che consente di cercare interazioni proteiche deboli in soluzione senza la necessità di etichette o immobilizzazione. Quindi i ricercatori possono osservare le proteine di interesse e come interagiscono senza preoccuparsi che stiano interrompendo il sistema che stanno guardando.

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Questo mese in JoVE Numero 203 Microfluidica fotometria di massa interazioni proteina-proteina a bassa affinità anticorpo IgG recettore Fc neonatale

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