Name: Trapianto di polmone bioingegnerizzato utilizzando polmoni di topo decellularizzati e cellule endoteliali umane primarie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:25:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Scopri il protocollo standardizzato per la bioingegneria polmonare utilizzando blocchi cuore-polmone di topo decellularizzati e cellule endoteliali umane primarie. Questo metodo consente ricerche scalabili nel campo del trapianto di organi.

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<ol><li>van der Mark, S. C., Hoek, R. A. S., Hellemons, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+in+lung+transplantation+over+the+past+decade%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+Rev%22%5BJournal%5D)">Developments in lung transplantation over the past decade.</a> Eur Respir Rev. 29 (157), 190132(2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>DECELLULARIZZAZIONE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27 G x 1/2 poll. Ago BD PrecisionGlide</td><td>BD</td><td></td><td>305109 O equivalente Ago per iniezione da 27 G</td></tr><tr><td>Catetere BD Insyte IV 20 GA X 1,8 8IN</td><td>BD</td><td>381237</td><td>O equivalente Catetere IV da 20 G</td></tr><tr><td>Sutura in seta a lama (4-0)</td><td>Nesco</td><td>GA04SB</td><td>O equivalente</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>Catetere per vena giugulare di ratto, PU 2Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C20PU-MJV1301</td><td>Consigliato per topi di peso pari o inferiore a 30 g.</td></tr><tr><td>Catetere per vena giugulare di ratto, PU 3Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C30PU-RJV1307</td><td>Consigliato per topi pesa oltre 30 g.</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>Iniettori PinPort</td><td>Instech</td><td>PNP3M</td><td></td></tr><tr><td>, 22 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F22-50</td><td>Adatto a C30PU-RJV1307</td></tr><tr><td>PinPort, 25 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F25-50</td><td>Adatto per C20PU-MJV1301</td></tr><tr><td>Desossicolato di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Siringa sterile, 5 ml</td><td>Triton</td> X-100 generico <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr><tr><td>COLTURA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CELLULARE EGM-2 Terreno di crescita delle cellule endoteliali-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC Cellule endoteliali della vena ombelicale umana</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>BIOREATTORE BASATO SULLA PERFUSIONE Ago</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>da 20 G</td><td>Rubinetto generico</td><td></td><td></td></tr> a <tr><td>3 vie</td><td>Piralide</td> del sughero generico <td></td><td></td></tr><tr><td></td> Dimensione di foratura <td>generica</td><td></td>, testa della pompa EasyLoad III <td>6-10 mm</td></tr><tr><td></td><td>Cole-Parmer</td><td>243934</td><td></td></tr><tr><td>Glass contenitore</td><td>Hario</td><td>SCN-200T</td><td>Diametro interno: 80 mm</td></tr><tr><td>Agitatore magnetico riscaldante</td><td>Raccordo per</td> esche generico<td></td><td></td></tr><tr><td>, PVDF, per tubo morbido</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-01</td><td>Femmina, adatto per tubi con diametro interno 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Raccordo per esche, PVDF, per tubo morbido</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-01</td><td>Maschio, adatto per tubi con diametro interno 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Raccordo per esche, PVDF, per tubo morbido</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-03</td><td>Femmina, adatto a tubi con diametro interno 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Raccordo per esca, PVDF, per tubo morbido</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-03</td><td>Maschio, adatto a tubi con diametro interno 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Barra di agitazione magnetica</td><td>Generico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Azionamento modulare di precisione digitale con I/O remoto e controller da banco</td><td>Cole-Parmer</td><td>07557-00</td><td></td></tr><tr><td>Tubo per pompa di precisione Masterflex L/S, PharMed BPT, L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-16</td><td></td></tr><tr><td>Tubo per pompa Masterflex L/S Pricision, silicone polimerizzato al platino, L/S 14</td><td>Cole-Parmer</td><td>96410-14</td><td></td></tr><tr><td>Unità filtro per siringa Millex-GP, 0,22 e micro; m, polietersulfone, 33 mm, sterilizzato con raggi gamma</td><td>Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 250 mL flacone per erba, tappo a vite GL-45</td><td>Corning</td><td>1395-250</td><td></td></tr><tr><td>Setti in silicone per tappo a vite in PBT Open Top GL45 Corning</td><td>1395-455S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tappo leggero in silicone</td><td>IMG</td><td>07763-18</td><td>Diametro superiore: 87 mm, Diametro inferiore: 75 mm</td></tr><tr><td>Siringa sterile, 10 mL, 50 mL</td><td>Generico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CHIRURGIA DEL TOPO (Isolamento del blocco cuore-polmone | Trapianto di polmone)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 Fascette in nylon</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Fascette in seta</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Fascette in seta</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A Morsetto</td><td></td></tr><tr><td>arterioso, 45 mm curvo, scanalato</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>C-17-45</td><td></td></tr><tr><td>BD Catetere IV Insyte 24GA</td><td>BD</td><td>381512</td><td>Or catetere i.v. equivalente 24G</td></tr><tr><td>Bulldog Pinza Vascolare 45mm curvo</td><td>Natsume seisakusyo</td><td>M2</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol tartrato&nbsp;</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin Sodium</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dumont pinze #5/45</td><td>Fine Science Tools</td><td>1251-35</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla in stile vannas fine</td><td>Fine Science Tools</td><td>15403-08</td><td>Punta da 45 gradi, 0,01 x 0,06 mm</td></tr><tr><td>Kit cauterità Gemini</td><td>Harvard Apparatus</td><td>RS-300</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto Halsted-Mosquito punta curva, 125 mm</td><td>Centro di ricerca biologica</td><td>16181670</td><td></td></tr><tr><td>porta ago Hegar, 150 mm</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BM065R</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione Heparine</td><td>Mochida Seiyaku</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidina</td><td>Nippon Zenyaku Kogyo</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinza dritta</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BD33R</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Sandoz</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ventilatore per topi</td><td>Harvard Apparecchio</td><td>Modello 687&trade;</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina normale, grado clinico</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Petri dish, 60 x 15 mm</td><td>BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Safelet Cath PU Catetere in poliuretano calibro 20</td><td>Nipro</td><td>09-031</td><td></td></tr><tr><td>Forbici in acciaio inox Sakaki curve 14 cm</td><td>Centro di ricerca</td><td>biologica 64152034</td><td></td></tr><tr><td>Supporto per bisturi</td><td>Centro di ricerca 16101040</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema di retrazione per piccoli animali</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi a lama di ricambio #11</td><td>Muranaka Medical Instruments</td><td>567-001-03</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla, 15 cm</td><td>Centro di ricerca biologica</td><td>PRI13-3736</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Leica Microsystems</td><td>M525</td><td>È preferibile un microscopio chirurgico di livello clinico con un sistema a braccio flessibile.</td></tr><tr><td>Clip per aneurisma in titanio Sugita curva sottile, No.98</td><td>Mizuho medical</td><td>17-001-98</td><td></td></tr><tr><td>Applicatore di clip in titanio Sumita, 110 mm</td><td>Mizuho medical</td><td>17-013-53</td><td></td></tr><tr><td>Scaldabiberon elettrico regolabile in temperatura</td><td>Generico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tampone di cotone ultrafine</td><td>generico Generico</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BRACCIALE</td><td></td><td></td><td></td>VASCOLARE E BRONCHIALE</tr><tr><td>Fine carta vetrata</td><td>Generic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Venula 20 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1160</td><td></td></tr><tr><td>Venula 22 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1161</td><td></td></tr><tr><td>Venula 24 gauge Teflon angiocatheter</td><td>Top</td><td>1124</td><td></td></tr></tbody></table>

trapianto di polmone bioingegnerizzato utilizzando polmoni di topo decellularizzati e cellule endoteliali umane primarie

Transplantation of Bioengineered Lung Using Decellularized Mouse Lungs and Primary Human Endothelial Cells

Seguendo il protocollo di decellularizzazione, i polmoni di topo sono visibilmente bianchi e traslucidi (Figura 6A). I componenti cellulari devono essere completamente rimossi, ma la struttura alveolare rimane intatta nell'osservazione istologica (Figura 6B, C). I polmoni di topo ricellularizzati utilizzando 3 × 10 7 HUVEC con coltura di bioreattore basata sulla perfusione di 2 giorni mostrano una distribuzione omogenea di HUVEC (<strong class="...

Trapianto di polmone bioingegnerizzato utilizzando polmoni di topo decellularizzati e cellule endoteliali umane primarie

Lung transplantation is a critical treatment for patients with end-stage lung diseases like idiopathic pulmonary fibrosis, but challenges such as donor ...

transplantation-bioengineered-lung-using-decellularized-mouse-lungs

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Bioengineering

Bioingegneria

Abbiamo sviluppato una matrice extracellulare del polmone decellularized e bioreattore romanzo biomimetici che può essere utilizzato per generare il tessuto funzionale del polmone. Con la semina delle cellule e nella matrice coltura nel bioreattore, generiamo tessuto che dimostra efficace scambio di gas quando trapiantate in vivo per brevi periodi di tempo.

Procedura per l&#39;Ingegneria del polmone

La decellularizzazione dell'intero organo produce scaffold biologici naturali che possono essere utilizzati per la medicina rigenerativa. Viene presentata la descrizione di un modello di rigenerazione polmonare di primati non umani in cui interi polmoni vengono decellularizzati e quindi seminati con cellule staminali adulte e cellule endoteliali in un bioreattore che facilita la circolazione vascolare e la ventilazione con mezzi liquidi.

Decellularizzazione e ricellularizzazione polmonare di primati non umani utilizzando un bioreattore specializzato per grandi organi

Al fine di comprendere i meccanismi cellulari e molecolari alla base neotissue formazione e lo sviluppo di stenosi in ingegneria tessutale valvole cardiache, è stato sviluppato un modello murino di trapianto di valvole cardiache eterotopico. Una valvola cardiaca polmonare è stato trapiantato al destinatario utilizzando la tecnica di trapianto di cuore eterotopico.

Il trapianto di valvola polmonare Utilizzando un modello murino di trapianto cardiaco eterotopico

La ricapitolazione del microambiente organo-specifico, che stimola l'angiogenesi locale, è indispensabile per il successo della rigenerazione dei tessuti danneggiati. Questo rapporto dimostra un nuovo metodo per impiantare gel di fibrina sulla superficie polmonare di topo vivente al fine di esplorare come il microambiente polmonare specifico modula l'angiogenesi e la rigenerazione alveolare nel topo adulto.

L&#39;impianto di fibrina gel sul mouse polmone per studiare angiogenesi Lung-specifica

Qui, vi presentiamo un protocollo per generare ingegneria dei tessuti dei vasi innesti che sono funzionali per l'innesto in topi con un doppio semina cellule staminali pluripotenti indotte in parte (PiPSC) - derivato cellule muscolari lisce e PiPSC - cellule endoteliali derivate su una nave decellularized ponteggio bioreattore.

Generazione e innesto delle navi tissutale in un modello di topo

Questo protocollo dirige in modo efficiente topo staminali embrionali derivato dalle cellule endoderma definitivo per maturare delle vie aeree cellule epiteliali. Questa tecnica utilizza differenziazione 3-dimensionale impalcature polmone decellularized di indirizzare specifiche lignaggio del polmone, in un ambiente culturale privo di siero definito.

Generazione di cellule di topo Airway epiteliali ESC-derivati ​​dall&#39;uso di decellularized Lung Ponteggi

Questo protocollo descrive un metodo per generare tessuti polmonari ingegnerizzati riproducibili su piccola scala, ripopolando fette polmonari decellularizzate tagliate con precisione con cellule epiteliali alveolari di tipo 2, fibroblasti e cellule endoteliali.

Tessuti polmonari ingegnerizzati preparati da fette di polmone decellularizzate

In questo articolo, le cellule endoteliali polmonari primarie sono state isolate e coltivate da topi neonatali.

Isolamento delle cellule endoteliali polmonari primarie di topo

Presentato qui è un protocollo per l'isolamento del tessuto polmonare decellularizzato regionale. Questo protocollo fornisce un potente strumento per studiare le complessità nella matrice extracellulare e nelle interazioni cellula-matrice.

Dissezione e isolamento del tessuto polmonare decellularizzato specifico per regione

Qui, presentiamo un protocollo per l'imaging intravitale del polmone sinistro del topo trapiantato utilizzando la microscopia a due fotoni. Questo rappresenta uno strumento prezioso per studiare le dinamiche e le interazioni cellulari in tempo reale dopo il trapianto di polmone murino.

Microscopia intravitale a due fotoni del polmone di topo trapiantato

Scopri il protocollo standardizzato per la bioingegneria polmonare utilizzando blocchi cuore-polmone di topo decellularizzati e cellule endoteliali umane primarie. Questo metodo consente ricerche scalabili nel campo del trapianto di organi.

Trapianto di polmone bioingegnerizzato utilizzando polmoni di topo decellularizzati e cellule endoteliali umane primarie

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