Name: Saggio immunochimico convalidato per la determinazione completa del recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano rilasciato e legato alle cellule (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Scopri un saggio ELISA sandwich convalidato per la quantificazione precisa della proteina HER2 legata e rilasciata dalle cellule. Questo metodo utilizza anticorpi monoclonali anti-HER2 per applicazioni diagnostiche e di ricerca.

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1. Coltura di cellule tumorali umane
<ol><li>Colture di linee MDA-MB-231, SK-BR-3 e SK-OV-3 nel terreno Modified Eagle's di Dulbecco contenenti 4,5 g/L di ᴅ-glucosio (DMEM-HG), integrati con 2 mM di ʟ-glutammina e FBS inattivato termicamente al 10% (v/v). Incubare le colture a 37 °C in un'atmosfera umidificata al 5% di CO2.</li>
	<li>Quando la coltura raggiunge la confluenza di ~80%, staccare le cellule mediante tripsinizzazione e raccoglierle in provette coniche separate da 15 mL.</li>
	<li>Contare le cellule con un contatore automatico di cellule e seminare le cellule per l'esperimento in piastre a 12 pozzetti a una densità di 3 × 105 cellule/per pozzetto in 1 mL di terreno di crescita. Incubare le colture a 37 °C in un'atmosfera umidificata al 5% di CO2. NOTA: Seminare un pozzetto per ogni punto temporale dell'esperimento. Sia il terreno di post-coltura che i lisati cellulari saranno utilizzati in ulteriori analisi.</li>
</ol>2. Raccolta e preparazione dei campioni
<ol><li>Dalla coltura delle 24 ore, raccogliere il terreno di coltura da un pozzetto di ciascuna linea cellulare in una provetta da 1,5 mL.</li>
	<li>Centrifugare i campioni raccolti a 10 000 × g per 10 minuti a 4 °C. Trasferire il surnatante in una nuova provetta e conservarlo a -20 °C per determinare ulteriormente il livello di ECD HER2 secreto.</li>
	<li>Lavare le cellule rimanenti sulla piastra con 1 mL di PBS freddo, aspirare delicatamente ed eliminare il PBS.</li>
	<li>Aggiungere 200 μL di tampone RIPA (integrato con l'1% di inibitore della proteasi) in ciascun pozzetto e incubare per 5 minuti. Raschiare le cellule con il raschietto cellulare e mescolare pipettando più volte per omogeneizzare il lisato.</li>
	<li>Raccogliere le cellule lisate in una nuova provetta e aspirare lentamente in una siringa da 2 ml con un ago (G21 / 0,8 mm × 40 mm). Ripetere la fase di aspirazione 5-10 volte per disintegrare ulteriormente le cellule.</li>
	<li>Centrifugare i campioni raccolti a 10 000 x g per 10 minuti a 4 °C. Trasferire il surnatante in una nuova provetta e conservarlo a -20 °C per un'ulteriore determinazione della frazione legata alle cellule della proteina HER2.</li>
	<li>Ripetere la raccolta del terreno di coltura e dei materiali cellulari, seguendo le fasi di preparazione per i restanti punti temporali - 48 ore e 72 ore di coltura.</li>
</ol>3. Esecuzione di un ELISA a sandwich per la determinazione di HER2
<ol><li>Preparare i buffer.<ol><li>Tampone di rivestimento: Preparare la soluzione 0,1 M di NaHCO3 sciogliendo 0,42 g di NaHCO3 in 50 ml di acqua distillata e mescolare accuratamente. Regolare il pH a 9,6 con 3 M NaOH.</li>
		<li>Tampone bloccante: Preparare il latte scremato al 5% (NFDM) in PBS aggiungendo 0,5 g di latte in polvere assorbente a 10 ml di PBS e mescolare accuratamente.</li>
		<li>Tampone di lavaggio: Preparare soluzione salina tamponata con fosfato con Tween 20 (PBST) aggiungendo 0,5 mL di Tween-20 allo 0,05% a 1000 mL di PBS e mescolare (evitare un'eccessiva formazione di schiuma).</li>
	</ol></li>
	<li>Biotinilato l'anticorpo rilevante.<ol><li>Biotinilato 50-200 μg di rilevamento dell'anticorpo anti-HER2 (clone 70.21.73.67) utilizzando un kit di marcatura della biotina commerciale secondo le istruzioni del produttore. NOTA: L'affidabilità e la ripetibilità del processo di biotinilazione si basano sulla misurazione della concentrazione proteica finale dell'anticorpo risultante e sul confronto tra lotti del prodotto.</li>
	</ol></li>
	<li>Rivestire il piatto.<ol><li>Diluire l'anticorpo catturante anti-HER2 (clone 70.27.58) alla concentrazione di 1 μg/mL nel tampone di rivestimento. Per rivestire una piastra, utilizzare 6,5 mL della soluzione di anticorpi catturanti.</li>
		<li>Utilizzando una pipetta multicanale, aggiungere 100 μl della soluzione di anticorpi catturanti (preparata al punto 3.3.1) a ciascun pozzetto su una piastra ELISA a 96 pozzetti. NOTA: Evitare i pozzetti più esterni della piastra (ad es. A1, H12) per ridurre la variabilità causata dall'effetto bordo. I pozzetti più esterni devono essere riempiti con acqua distillata per garantire condizioni di reazione stabili.</li>
		<li>Coprire la piastra con una pellicola sigillante.</li>
		<li>Incubare la piastra per una notte (O/N) a 4 °C.</li>
		<li>Dopo l'incubazione O/N, posizionare la piastra a temperatura ambiente (RT) su un agitatore orizzontale per micropiastre (20-30 giri/min con un angolo di inclinazione di 4°-6°) per 1 ora.</li>
		<li>Utilizzando una lavatrice per micropiastre, aspirare la soluzione di rivestimento e lavare la piastra tre volte con un tampone di lavaggio (3 x 300 μl di PBST per pozzetto).</li>
	</ol></li>
	<li>Bloccare la piastra .<ol><li>Utilizzando una pipetta multicanale, aggiungere 100 μL di tampone bloccante (5% NFDM in PBS) a ciascun pozzetto rivestito per bloccare i siti di legame non specifici.</li>
		<li>Coprire la piastra con una pellicola sigillante.</li>
		<li>Incubare la piastra per 1 ora a 37 °C in una camera di umidità.</li>
		<li>Utilizzando una lavatrice per micropiastre, aspirare la soluzione di rivestimento e lavare la piastra tre volte con un tampone di lavaggio (3 x 300 μl di PBST per pozzetto).</li>
	</ol></li>
	<li>Preparare una curva di calibrazione e un controllo positivo (Figura 2).<ol><li>Preparare la soluzione standard di lavoro dell'antigene HER2 aggiungendo 2 μL di soluzione madre da 1 mg/mL a 1998 μL di PBS per ottenere una concentrazione di HER2 di 0,001 mg/mL (1000 ng/mL).</li>
		<li>Diluire la soluzione standard di lavoro (WSS) aggiungendo 200 μl della soluzione a 1800 μl di PBS per ottenere la soluzione standard 1 (STD 1).</li>
		<li>Preparare i successivi sei standard (STD 2-STD 7) mediante diluizioni seriali di STD 1 in PBS (Figura 2).<ol><li>STD 2: aggiungere 500 μl di STD 1 a 500 μl di PBS e mescolare accuratamente per preparare 50 ng/mL.</li>
			<li>STD 3: Aggiungere 500 μL di STD 2 a 500 μL di PBS e mescolare accuratamente per preparare 25 ng/mL.</li>
			<li>STD 4: Aggiungere 500 μl di STD 3 a 500 μl di PBS e mescolare accuratamente per preparare 12,5 ng/mL.</li>
			<li>STD 5: aggiungere 500 μl di STD 4 a 500 μl di PBS e mescolare accuratamente per preparare 6,25 ng/mL.</li>
			<li>STD 6: aggiungere 500 μl di STD 5 a 500 μl di PBS e mescolare accuratamente per preparare 3,125 ng/mL.</li>
			<li>STD 7: Aggiungere 500 μl di STD 6 a 500 μl di PBS e mescolare accuratamente per preparare 1,5625 ng/mL.</li>
			<li>STD 8: Aggiungere 500 μL di PBS per preparare 0 ng/mL.</li>
		</ol></li>
		<li>Controllo positivo: diluire STD 1 aggiungendo 100 μL della soluzione STD 1 a 900 μL di PBS per ottenere una soluzione di HER2 a una concentrazione proteica di 10 ng/mL.</li>
	</ol></li>
	<li>Preparare i campioni per gli esperimenti di spike e recupero.<ol><li>Preparare i campioni di matrice (PBS, lisati cellulari e terreno di coltura) addizionati con la concentrazione nota della proteina HER2. Diluire i lisati cellulari 1:2000 aggiungendo 2,5 μL di lisato cellulare appropriato a 5 mL di PBS per ottenere una matrice di campione con un livello di HER2 inferiore al LOD del metodo.</li>
		<li>Utilizzare WSS (1000 ng/mL) e STD1 (100 ng/mL) per aumentare i campioni della matrice.</li>
		<li>Per ogni matrice, preparare 6 campioni con concentrazioni di 0, 2, 5, 10, 30 e 50 ng/mL.</li>
		<li>Per preparare 0 ng/mL, aggiungere 400 μL di PBS/terreno di coltura/lisato cellulare.</li>
		<li>Per preparare 2 ng/mL, aggiungere 8 μL di STD1 a 392 μL di PBS/terreno di coltura/lisato cellulare e mescolare accuratamente.</li>
		<li>Per preparare 5 ng/mL, aggiungere 20 μL di STD1 a 380 μL di PBS/terreno di coltura/lisato cellulare e mescolare accuratamente.</li>
		<li>Per preparare 10 ng/mL, aggiungere 4 μL di WSS a 396 μL di PBS/terreno di coltura/lisato cellulare e mescolare accuratamente.</li>
		<li>Per preparare 30 ng/mL, aggiungere 12 μL di WSS a 388 μL di PBS/terreno di coltura/lisato cellulare e mescolare accuratamente.</li>
		<li>Per preparare 50 ng/mL, aggiungere 20 μL di WSS a 380 μL di PBS/terreno di coltura/lisato cellulare e mescolare accuratamente.</li>
	</ol></li>
	<li>Aggiungere il campione, lo spazio vuoto e lo standard.<ol><li>Utilizzando una pipetta a canale singolo, aggiungere 100 μl di standard, bianco (PBS) e campioni testati (lisati cellulari e terreno di coltura) ai pozzetti appropriati. NOTA: Si consiglia di eseguire ogni campione in triplice copia.</li>
		<li>Coprire la piastra con una pellicola sigillante.</li>
		<li>Incubare la piastra per 1 ora a 37 °C in una camera di umidità.</li>
		<li>Utilizzando una lavatrice per micropiastre, aspirare la soluzione di rivestimento e lavare la piastra tre volte con un tampone di lavaggio (3 x 300 μl di PBST per pozzetto).</li>
	</ol></li>
	<li>Rileva il legame degli anticorpi.<ol><li>Diluire l'anticorpo rivelatore biotinilato (clone 70.21.73.67) in PBS a una concentrazione di lavoro di 1 μg/mL. Per una piastra, utilizzare 6,5 mL di soluzione di lavoro per l'anticorpo rilevante.</li>
		<li>Utilizzando una pipetta multicanale, aggiungere 100 μl della soluzione di lavoro dell'anticorpo di rilevamento a ciascun pozzetto.</li>
		<li>Coprire la piastra con una pellicola sigillante.</li>
		<li>Incubare la piastra per 1 ora a 37 °C in una camera di umidità.</li>
		<li>Utilizzando una lavatrice per micropiastre, aspirare la soluzione di rivestimento e lavare la piastra tre volte con un tampone di lavaggio (3 x 300 μl di PBST per pozzetto).</li>
	</ol></li>
	<li>Aggiungere il coniugato Avidin-HRP.<ol><li>Diluire il coniugato Avidin-HRP disponibile in commercio 1:40.000 aggiungendo 1 μL di coniugato enzimatico a 40 mL di PBST.</li>
		<li>Utilizzando una pipetta multicanale, aggiungere 100 μl di coniugato diluito a ciascun pozzetto.</li>
		<li>Coprire la piastra con una pellicola sigillante.</li>
		<li>Incubare la piastra per 1 ora a 37 °C in una camera di umidità.</li>
		<li>Utilizzando una lavatrice per micropiastre, aspirare la soluzione di rivestimento e lavare la piastra tre volte con un tampone di lavaggio (3 x 300 μl di PBST per pozzetto).</li>
	</ol></li>
	<li>Reazione colorimetrica<ol><li>Utilizzando una pipetta multicanale, aggiungere 100 μL di substrato di 3,3′,5,5′-tetrametilbenzidina (TMB) a ciascun pozzetto.</li>
		<li>Coprire la piastra con una pellicola sigillante.</li>
		<li>Incubare la piastra per 1-5 minuti a 37 °C al riparo dalla luce e monitorare lo sviluppo del colore.</li>
		<li>Quando il colore raggiunge il livello previsto, aggiungere 100 μL di soluzione di arresto per terminare la reazione. NOTA: Il livello atteso corrisponde a un colore blu intenso nei pozzetti contenenti campioni con un'alta concentrazione dell'analita.</li>
	</ol></li>
	<li>Acquisisci e analizza i dati.<ol><li>Misurare l'assorbanza a 450 nm utilizzando un lettore di micropiastre.</li>
		<li>Utilizzando una curva di calibrazione a 4 parametri, calcolare la concentrazione del campione in base all'equazione della curva.</li>
	</ol></li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68204/68204fig1v5.jpg"> Figura 1: Diagramma schematico del flusso di lavoro ELISA a sandwich anti-HER2 sviluppato. Panoramica delle fasi chiave della procedura ELISA a sandwich. Questi includono le fasi critiche (evidenziate da una cornice rossa) come il rivestimento della piastra con l'anticorpo anti-HER2 70.27.58, l'aggiunta di campioni (standard di curva, bianco, campioni sperimentali dei lisati cellulari o del terreno di coltura) e il legame dell'anticorpo anti-HER2 70.21.73.67. Il test si conclude con il rilevamento del segnale e l'analisi dei dati, in cui il segnale colorimetrico viene quantificato utilizzando un lettore di micropiastre per determinare la concentrazione dell'antigene target. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68204/68204fig1v5large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68204/68204fig02.jpg"> Figura 2: Schema che presenta la preparazione delle soluzioni standard della curva di calibrazione. Le diluizioni seriali della proteina ricombinante HER2 sono preparate per generare una curva di calibrazione in un intervallo di concentrazione di 1,56-100 ng/mL (fiale STD 1-STD 7). Inoltre, è incluso il campione di controllo negativo senza la proteina HER2 (STD 8). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68204/68204fig02large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

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<li>NinioMany, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR125a+induces+HER2+expression+and+sensitivity+to+trastuzumab+in+triplenegative+breast+cancer+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">miR125a induces HER2 expression and sensitivity to trastuzumab in triplenegative breast cancer lines.</a> Front Oncol. 10, 191(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kit di etichettatura della biotina-NH2</td><td>Abnova</td><td>KA0003</td><td></td></tr><tr><td>Blotting Grade, latte in polvere, a basso contenuto di grassi</td><td>Roth</td><td>T145.1</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini per conteggio cellulare TC10/TC20 Contatore, Piastre</td> per colture cellulari <td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td></td>a doppia camera</tr><tr><td>Biologix</td><td>07-6012</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Raschietti cellulari</td><td>Biologix</td><td>70-1250</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Ohaus</td><td>30130868</td><td></td></tr><tr><td>Classe II Cabina di Sicurezza Biologica - Telstar Bio II Advance 6</td><td>Telstar</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Piastre trasparenti a fondo piatto a 96 pozzetti</td><td>Thermo Fisher</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Incubatori CO2 - Touch 190S</td><td>Leec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsolfossido&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMEM - alto glucosio</td><td>Sigma</td><td>Aldrich D0822</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di piastre ELISA</td><td>BioTek</td><td>800TSUVI</td><td></td></tr><tr><td>FBS Standard, siero fetale bovino</td><td>PAN Biotech</td><td>P30-19375</td><td></td></tr><tr><td>Essiccatore da laboratorio a circolazione forzata</td><td>BINDER</td><td>9090-0018</td><td></td></tr><tr><td>HRP-Avidin</td><td>Thermo Fisher</td><td>43-4423</td><td></td></tr><tr><td>Proteina umana Her2 / ErbB2, etichetta Fc, grado premium</td><td>AcroBIOSYSTEMS</td><td>HER2-H5253</td><td></td></tr><tr><td>Immunowash Microplate Washer</td><td>Bio-Rad</td><td>170-7009</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di L-glutammina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (clone 70.21.73.67)</td><td>SDS Optic</td><td>BIO-ABH-2</td><td></td></tr><tr><td>mAb a-HER2 (clone 70.27.58)</td><td>SDS Optic</td><td>BIO-ABH-1</td><td></td></tr><tr><td>MDA-MB-231 Linea cellulare</td><td>ATCC</td><td>HTB-26</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>POCH</td><td>810530115</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>POCH</td><td>BA0981118</td><td></td></tr><tr><td>Inibitore della proteasi Cocktail</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>RIPA Buffer</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>ROTI Fair PBS</td><td>Roth</td><td>1111.2</td><td></td></tr><tr><td>SK-BR-3 [SKBR3] Linea cellulare</td><td>ATCC</td><td>HTB-30</td><td></td></tr><tr><td>SK-OV-3 [SKOV-3; SKOV3] Linea cellulare</td><td>ATCC</td><td>HTB-77</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di arresto 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210900</td><td></td></tr><tr><td>TC20 Contatore di celle automatizzato</td><td>Bio-rad</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>Substrato TMB 1x</td><td>Abcam</td><td>ab210902</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Ohaus</td><td>30392117</td><td></td></tr><tr><td>Agitatore di movimento ondulatorio</td><td>Ohaus</td><td>30391968</td><td></td></tr></tbody></table>

saggio immunochimico convalidato per la determinazione completa del recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano rilasciato e legato alle cellule

Validated Immunochemical Assay for Comprehensive Determination of the Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Released from and Bound to Cells

Convalida ELISA a sandwich Il test di nuova concezione richiede una procedura di convalida. I parametri di convalida importanti includono la linearità, la precisione e i limiti di rilevamento, ovvero il limite inferiore di rilevamento (LLOD) e il limite superiore di rilevamento. Nell'articolo precedente, abbiamo eseguito un'accurata convalida del metodo. La linearità dell'ELISA è stata testata utilizzando i campioni simulati per concentrazioni basse (2, 5, 10 ng/mL), medio-alte (30 ng/mL) e significat...

Saggio immunochimico convalidato per la determinazione completa del recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano rilasciato e legato alle cellule

Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is a well-established cancer marker. It became a very successful diagnostic and therapeutic target, ...

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Il saggio di rilascio di cromo, un test comune per rilevare l'attività delle cellule T citotossiche, ha diversi limiti. Utilizzando cellule T CD8 antigene-specifici e la linea tumorale umano cancro al seno, SKBR3, nel presente articolo, un approccio basato impedenza è stata esaminata per la capacità di rilevare uccisione delle cellule.

Determinazione ottimale attività citotossica di specifiche cellule T umane Her2neu CD8 confrontando il Cr51 saggio di rilascio al Sistema xCELLigence

Nel corso degli ultimi anni, saggi cellulari vivi sono stati utilizzati con successo per rilevare gli anticorpi contro gli antigeni di superficie e conformazionale. Qui, descriviamo un metodo con elevate throughput citometria consentire l'analisi di grandi coorti di pazienti. Individuazione di anticorpi romanzo migliorare la diagnosi e il trattamento di disturbi immuno-mediata.

High-throughput Citometria a Flusso test cellulare per individuare gli anticorpi per N-metil-D-aspartato Receptor o dopamina-2 recettore nel siero umano

Questo protocollo descrive l'etichettatura del recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) sulle cellule di fibroblasti COS7 e la successiva microscopia ottica ed elettronica correlativa di cellule intere allo stato idratato. L'etichetta conteneva punti quantici fluorescenti. Il protocollo può essere utilizzato per studiare la stechiometria dell'EGFR a livello di singola molecola.

Studiare la Stechiometria di Epidermal Growth Factor Receptor in cellule intatte con correlativa Microscopia

Descriviamo un semplice test su cellule-base per la rilevazione, la quantificazione e il monitoraggio dell'attività dei membri della famiglia endoteliale vascolare del fattore di crescita dei leganti. Il saggio utilizza recettori chimerici espressi in una linea cellulare fattore dipendente per fornire una valutazione semiquantitativa o quantitativa di legame recettoriale e reticolazione del legante.

Un saggio biologico semplice per la valutazione dei fattori di crescita dell&#39;endotelio vascolare

Messa a fuoco isoelettrica capillare è una tecnica di basati su anticorpi, ultrasensibile, alta velocità di trasmissione, consentendo la dettagliata caratterizzazione delle proteine e loro isoforme da campioni biologici estremamente piccoli. Di seguito viene descritto un protocollo per il rilevamento e la quantificazione delle proteine specifiche e loro isoforme in modo automatizzato e robotizzato.

Rilevamento altamente sensibile e quantitativo delle proteine e loro isoforme dal metodo di messa a fuoco isoelettrica capillare

Gli anticorpi che si legano ai recettori bersaglio sulla superficie delle cellule possono conferire conformazione e alterazioni clustering. Questi cambiamenti dinamici hanno implicazioni per caratterizzare lo sviluppo di farmaci nelle cellule bersaglio. Questo protocollo utilizza la microscopia confocale e spettroscopia di correlazione di immagine attraverso ImageJ/FIJI per quantificare l'entità del recettore sulla superficie cellulare di clustering.

Microscopia confocale rivela l'aggregazione di recettore di superficie delle cellule tramite spettroscopia di correlazione di immagine

Qui presentiamo un metodo di cytometry di flusso basato su cellulare per rilevare anticorpi neutralizzanti o altri fattori che interferiscono con l'assorbimento cellulare di terapie sostitutive enzima in una matrice umana, come un liquido spinale cerebrale (CSF) o siero umano.

Rilevazione degli anticorpi che neutralizzano l'assorbimento cellulare di terapie di sostituzione enzimatica con un'analisi Cell-based

Descriviamo un sistema quantitativo di analisi della citolisi in vitro in tempo reale per valutare la potenza delle cellule T del recettore dell'antigene chimerico che prendono di mira le cellule tumorali liquide e solide. Questo protocollo può essere esteso per valutare altre cellule echeggiatrici immunitarie, così come i trattamenti combinati.

Un esempio di potenza in tempo reale per le cellule T del recettore dell'antigene chimerico rivolte alle cellule tumorali solide ed ematologiche

Un passo necessario nello sviluppo dell'aptamero antitumorale è testare il suo legame con il bersaglio. Dimostriamo un saggio basato sulla citometria a flusso per studiare questo legame, sottolineando l'importanza di includere un aptamero di controllo negativo e cellule tumorali positive o negative per quella particolare proteina.

Un saggio di legame proteico della superficie cellulare basato sulla citometria a flusso per valutare la selettività e la specificità di un aptamero antitumorale

Qui, presentiamo un protocollo per un test di citotossicità cellulo-mediata (ADCC) anticorpo-dipendente utilizzando un kit di biotest ADCC. Questo metodo offre uno strumento prezioso per chiarire il meccanismo dell'ADCC e valutare il potenziale terapeutico degli anticorpi nell'immunoterapia del cancro.

Valutazione della citotossicità cellulo-mediata anticorpo-dipendente nelle cellule tumorali utilizzando il biotest del reporter di citotossicità cellulo-mediata anticorpo-dipendente

Scopri un saggio ELISA sandwich convalidato per la quantificazione precisa della proteina HER2 legata e rilasciata dalle cellule. Questo metodo utilizza anticorpi monoclonali anti-HER2 per applicazioni diagnostiche e di ricerca.

Saggio immunochimico convalidato per la determinazione completa del recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano rilasciato e legato alle cellule (Video) | JoVE Journal

Saggio immunochimico convalidato per la determinazione completa del recettore 2 del fattore di crescita epidermico umano rilasciato e legato alle cellule

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