Name: 3D Flipwell Engineering per lo sviluppo di sistemi asincroni per terapie tossicologiche e immunomodulatorie in cellule batteriche, intestinali e immunitarie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Scopri un sistema di co-cultura 3D che simula l'ambiente mucoso intestinale per valutare le risposte ai farmaci e le interazioni cellulari tra batteri, cellule epiteliali e macrofagi.

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<ol><li>Goldsmith, J. R., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+diet+on+intestinal+microbiota+metabolism%3A+downstream+impacts+on+host+immune+function+and+health%2C+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">The role of diet on intestinal microbiota metabolism: downstream impacts on host immune function and health, and therapeutic implications.</a> J Gastroenterol. 49 (5), 785-798 (2014).</li>
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<li>Ren, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+Basal+Nitric+Oxide+Production+Induces+Precancerous+Mammary+Lesions+via+ERBB2+and+TGF%CE%B2%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Reduced Basal Nitric Oxide Production Induces Precancerous Mammary Lesions via ERBB2 and TGFβ.</a> Sci Rep. 9 (1), 6688(2019).</li>
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<li>Umehara, Y., Aoyagi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+simple+cultured+cell-anaerobic+microbial+co-culture+system+using+liquid+paraffin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Development of a simple cultured cell-anaerobic microbial co-culture system using liquid paraffin.</a> J Biosci Bioeng. 135 (6), 487-492 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,4% PFA (vedi ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>descritto nel testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica da 10 ml</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>Placca TC da 12 pozzi, &nbsp; Costar</td><td>Corning</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>Tubi conici da 15 ml, SpectraTube</td><td>Alkali Scientific</td><td>C2715</td><td></td></tr><tr><td>200 & micro; l consigli &nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>1111-1700</td><td></td></tr><tr><td>Inserti a 24 pozzi - Inserti in coltura per piastre a 24 pozzi, PET 0.4 e micro; m&nbsp;</td><td>BrandTech Scientific</td><td>782710</td><td></td></tr><tr><td>Flipwells 3D preconfezionati, sterilizzati UV &nbsp;</td><td>Laboratorio Make in</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% PFA (vedi ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>descritto nel testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scorta di Sepiapterin da 50 mM (SEP, vedi la ricetta in Reagents and Solution)</td><td>Carriera Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>Tubi conici da 50 ml</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica da 5 ml</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>70-95% etanolo (alcol etilico)</td><td>Decon Labs</td><td>04-355-151</td><td></td></tr><tr><td>Alluminio</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Aghi per l'alimentazione animale, calibro 20 1.5" lunghezza, uso singolo&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-208-87</td><td></td></tr><tr><td>Buffer di diluizione degli anticorpi (vedi ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>descritto nel testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Camera Cellulare di Attofluor &nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A7816</td><td></td></tr><tr><td>Nastro autoclave</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-111</td><td></td></tr><tr><td>Ceppi di Bacillus subtilis wt (3A1T) nello stock di glicerolo ()</td><td>Centro di Stocco Genetico Bacillus (https:// bgsc. org/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guanti BioGrip Pink Nitrile senza polvere senza lattice</td><td>Produzione di alta qualità</td><td>P2810</td><td></td></tr><tr><td>Buffer bloccante (vedi ricetta in Reagents and Solutions - 10% Siero normale di capra in PBS)</td><td>descritto nel testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer bloccante (vedi ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>descritto nel testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a campo chiaro (Nikon o equivalente) Eclipse Ts2</td><td>Nikon</td><td>TS2</td><td></td></tr><tr><td>Celle Caco-2</td><td>ATCC</td><td>HTB-37</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore di colture cellulari, 37&deg; C, 5% CO2 (Eppendorf CellXpert)</td><td>Eppendorf</td><td>6734010015</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga (Eppendorf, centrifuga 5804/5804 R o equivalente</td><td>Eppendorf</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>Tubi centrifughe da 50 ml SpectraTube</td><td>Alkali Scientific</td><td>C2750</td><td></td></tr><tr><td>Inserti di coltura per piastre a 12 pozzi, PET, 0,4 & micro; m, sterile</td><td>BrandTech Scientific, BRAND Insert 2in1, BIO-CERT</td><td>782730</td><td></td></tr><tr><td>Mezzo di montaggio DAPI VectaShield</td><td>Laboratori Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Fondali profondi in piastra di Petri, piastra di Petri impilabile in polistirene profondo 100 x 25 mm, sterile e nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>8609-0625</td><td></td></tr><tr><td>XP di aiuto per pipette di Drummond</td><td>Drummond&nbsp;</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga Eppendorf 5804 con rotore a secchio oscillante per tubi conici da 50 ml</td><td>Eppendorf</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>Pinzep, acciaio inossidabile, autoclave sterile, 2 set</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>Pinzep, acciaio inossidabile, autoclave sterile, 2 set, pinza per campioni</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>Fiaschetta di vetro 500 ml</td><td>Corning&nbsp;</td><td>4980-500</td><td></td></tr><tr><td>Ematocitometro (Neubauer con scappi di copertura)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50-312-90</td><td></td></tr><tr><td>Celle HT-29-MTX-E12</td><td>Millipore Sigma</td><td>12040401</td><td></td></tr><tr><td>ImmunoPen (opzionale)</td><td>Fisher Scientific</td><td>4021761EA</td><td></td></tr><tr><td>Guanti a base di Kevlar o altri guanti resistenti ai tagli (opzionale)</td><td>Ferramenta o Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nastro da laboratorio o nastro da spedizione</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>159015R</td><td></td></tr><tr><td>Cappa a flusso laminare Serie 1300 A2 BSC Classe II</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1375</td><td></td></tr><tr><td>Cappa a flusso laminare con luce UV SterilGARD</td><td>La Baker Company</td><td>SG403A-HE</td><td></td></tr><tr><td>Marcatori a prova di solventi</td><td>VWR</td><td>52877-310 o 95042-566</td><td></td></tr><tr><td>Mezzi per cellule Caco-2 (DMEM ad alto livello di glucosio, vedi ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>descritto in &nbsp; Testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mezzi per cellule HT-29 (DMEM High Glucosio, vedi la ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>descritto nel testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mezzi per celle THP-1 (RPMI, vedi ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>descritto nel testo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubo microcentrifuga, 1,7 ml, sterile e nbsp;</td><td>Alkali Scientific</td><td>C3017-ST</td><td></td></tr><tr><td>Tubi microcentrifughe</td><td>Thermo Fisher</td><td>3451</td><td></td></tr><tr><td>Substrati Miller LB (vedi ricetta in Reagents and Solutions)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>Pinze a becco fine, 2 serie</td><td>Ferramenta o Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Guanti Aurelia Amazing senza polvere di nitrile senza lattice</td><td>MidSci</td><td>92885</td><td></td></tr><tr><td>Coperchi per piastre di Petri, sterili Falcon Petri Dish stile 100x15 mm</td><td>Corning Inc</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Phorbol myristate acetato (PMA) (100 ng/&mu; l, vedi la ricetta in Reagents and Solutions) e nbsp;</td><td>InvivoGen</td><td>Tlrl-pma</td><td></td></tr><tr><td>Punte per pipette (10 & micro; L, 200 & micro; 1000 & micro; l) PurePoint o equivalente</td><td>Alkali Scientific&nbsp;</td><td>ST1010-CS, ST1200-CS, ST1000-CS</td><td></td></tr><tr><td>Pellicola trasparente</td><td>Supermercato</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di collagenasi lavorativa Purecol (100 & micro; g/mL)</td><td>Advanced BioMatrix</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Slip di copertura rotonda #1 1 oz (Corning Float Glass o Fisherbrand)</td><td>Corning o Fisherbrand</td><td>50143822 o 12-546-2 25CIR-2</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi, sterili, usa e getta...</td><td>Mopec o Feather #10</td><td>AJ136 o 2975#10</td><td></td></tr><tr><td>Sepiapterina (settembre, 100 & micro; M, vedi la ricetta in Reagents and Solution)</td><td>Carriera Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore a scuotimento impostato per 220 giri/min 37&deg; C</td><td>Eppendorf New Brunswick Scientifico</td><td>M12990080</td><td></td></tr><tr><td>Adesivo in silicone Loctite Silicone trasparente IDH o 3M Marine Grade Silicone Garden con punta al naso</td><td>Loctite o 3M</td><td>1745658 o PN08019</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta a canale singolo Eppendorf Research Plus, 200 & micro; l</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette a canale singolo (10 & micro; L, 200 & micro; 1000 & micro; l)</td><td>Eppendorf</td><td>2231001122</td><td></td></tr><tr><td>Spettrofotometro NanoDropOneC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-400-519</td><td></td></tr><tr><td>Acqua deionizzata sterile &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Serina tamponata con fosfato sterile (PBS) senza calcio né magnesio</td><td>Fisher Scientific</td><td>&nbsp; BSS-PBS-1X6</td><td></td></tr><tr><td>Siringa 3 ml o 5 ml con punta Luer-Lok</td><td>BD</td><td>309585 o 309603</td><td></td></tr><tr><td>Celle THP-1</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr><tr><td>Pipette da trasferimento, sterili</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-20</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione blu di tripano</td><td>VWR</td><td>97063-702</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA 0,25%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Cancella Kimwipes Professional con Poliureshield Anti-Stato LintGuard</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td><forte>Anticorpi primari:&nbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD163</td><td>Abcam</td><td>156769</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD68</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB100-683-0,1 mg</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umano CD80, E3Q9V</td><td>Tecnologie di segnalazione cellulare</td><td>15416</td><td></td></tr><tr><td>Anti-umani CK20&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>PA5-82875</td><td></td></tr><tr><td>MUC2 anti-umano (996/1)</td><td>ThermoFisher</td><td>MA5-12345</td><td></td></tr><tr><td><forte>Anticorpi secondari: </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Goat anti-Rabbit IgG (per CD80 e CK20)</td><td>ThermoFisher</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG (per MUC2 e CD68 o CD163)</td><td>ThermoFisher</td><td>A11005</td><td></td></tr><tr><td><forte>Reagenti e Soluzioni:&nbsp; &nbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><forte>Caco-2 Medio:</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM con glucosio alto (4,5g/L) e 1% (v:v) di GlutaMax&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10% (v:v) inattivato dal calore</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Amminoacidi non essenziali all'1% per il substrato Caco-2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11140076</td><td></td></tr><tr><td>Streptococco della penna 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><forte>HT-29-MTX Medio</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM con glucosio alto (4,5g/L) e 1% (v:v) di GlutaMax&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10% (v:v) inattivato dal calore</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (concentrazione finale di 10 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Streptococco della penna 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><forte>THP-1 Medio:</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS (10% v:v) siero fetale inattivato al calore</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Glucosio (concentrazione finale di 4,5 g/L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A249001</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax 1% (v:v)&nbsp; Concentrazione finale di 2 mM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (concentrazione finale di 10 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Streptococco della penna 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI)-1640 media</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato di sodio (1 mM di concentrazione finale)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td><Soluzione di collagenasi lavorativa >Purecol (diluizione a 1:30 100 & micro; g/ml):</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Purecol 3 mg/ml 1:30 a 100 & micro; g/ml&nbsp;</td><td>Advanced BioMatrix</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Acqua sterile deionizzata</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><soluzione stock>L-Sepiapterin forte (50 mM): </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Sepiapterina (SEP)</td><td>Carriera Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td><Soluzione di actato di miristato di Phorbol forte> 5 mg/mL)</forte></td><td>InvivoGen</td><td>Tlrl-pma</td><td></td></tr><tr><td>BSA 1% albumina sierica bovina &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Miller LB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>Siero normale della stessa specie dell'anticorpo secondario</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>NS02L-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr></tbody></table>

3d flipwell engineering per lo sviluppo di sistemi asincroni per terapie tossicologiche e immunomodulatorie in cellule batteriche, intestinali e immunitarie

3D Flipwell Engineering for Developing Asynchronous Systems for Toxicologic and Immunomodulatory Therapies in Bacterial, Gut, and Immune Cells

3D Flipwell Engineering per lo sviluppo di sistemi asincroni per terapie tossicologiche e immunomodulatorie in cellule batteriche, intestinali e immunitarie

To study the roles of bacterial secretome in immune cell polarization and gut mucosal homeostasis, we developed a 3-dimensional co-culture model using ...

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3D Flipwell Engineering per lo sviluppo di sistemi asincroni per terapie tossicologiche e immunomodulatorie in cellule batteriche, intestinali e immunitarie (Video) | JoVE Journal

3D Flipwell Engineering per lo sviluppo di sistemi asincroni per terapie tossicologiche e immunomodulatorie in cellule batteriche, intestinali e immunitarie

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