Una tecnica rapida per la visualizzazione di Live cellule di lievito immobilizzato
November 9th, 2006
Una tecnica rapida per la visualizzazione di crescere cellule di lievito immobilizzate, qui applicata ai giornalisti fluorescenti al silenzioso accoppiamento loci HML e HMR
Lo scopo dell'esperimento è quello di essere in grado di seguire una popolazione di fornire sir uno cellule al microscopio in modo che io possa vedere come gli stati epigenetici cambiano quanto spesso gli stati epigenici cambiano con ciascuno, con ogni successiva divisione delle cellule, prendere un lungo vetrino, prendere circa sette microlitri di cellule, Posizionare sul vetrino coprioggetto lungo e utilizzare un COM, una piastra per supporti sintetici. Prendi una lama di rasoio e poi fai dei tagli nell'agar. Quindi prendi un blocco di agar, sollevalo e posizionalo sopra le cellule.
Ok, per esperimenti a breve termine, fino a tre ore. Questo di per sé va bene. Le cellule saranno immobilizzate per esperimenti a lungo termine, aggiungo un mezzo liquido alla parte superiore del tampone di agar e poi metto un vetrino sopra il tutto.
I media ci forniranno come un sigillo tra i due. Il, lo scivolo serve esclusivamente a prevenire l'evaporazione dalla parte superiore del blocco agar. Quindi, con questa configurazione, il blocco di egger rimarrà umido e le cellule continueranno a dividersi per un massimo di otto, almeno fino a otto ore.
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Panoramica
Questo articolo presenta una tecnica rapida per visualizzare cellule di lievito immobilizzate, concentrandosi sui reporter fluorescenti nei loci di accoppiamento silenziosi HML e HMR. Il metodo consente l'osservazione dei cambiamenti dello stato epigenetico durante la divisione cellulare.
Componenti principali dello studio
Area della scienza
- Biologia cellulare
- Epigenetica
- Fisiologia microbica
Conoscenze di base
- Comprendere i cambiamenti epigenetici nelle cellule di lievito è cruciale per acquisire informazioni sul comportamento cellulare.
- I reporter fluorescenti possono visualizzare efficacemente i loci genetici.
- Le tecniche di immobilizzazione sono essenziali per l'osservazione a lungo termine al microscopio.
- Il lievito serve come organismo modello per lo studio dei processi genetici ed epigenetici.
Obiettivo dello studio
- Visualizzare la crescita e la divisione delle cellule di lievito immobilizzate.
- Monitorare i cambiamenti degli stati epigenetici durante la divisione cellulare.
- Sviluppare un metodo che faciliti gli esperimenti a breve e lungo termine.
Metodi utilizzati
- Preparazione di una lunga vetrina con un volume specifico di cellule di lievito.
- Utilizzo di piastre di terreno sintetico per la crescita cellulare.
- Immobilizzazione delle cellule utilizzando blocchi di agar per l'osservazione.
- Applicazione di terreno liquido per durate sperimentali prolungate.
Risultati principali
- Viabilizzazione di successo della crescita e divisione delle cellule di lievito.
- Osservazione dei cambiamenti dello stato epigenetico durante divisioni successive.
- Dimostrazione dell'efficacia della tecnica di immobilizzazione.
- Informazioni sulla dinamica dei cambiamenti epigenetici nel lievito.
Conclusioni
- La tecnica fornisce un metodo affidabile per studiare il comportamento delle cellule di lievito.
- I reporter fluorescenti sono efficaci per monitorare i loci genetici.
- Questo approccio può migliorare la comprensione della regolazione epigenetica nelle cellule.
