0 閲覧数 • 2:52 分 • April 30th, 2023
- まずは交配水槽、卵が落ちるように取り外し可能なインサート付きの水槽からスタートします。胚収集の前の夕方に、2匹のオスと3匹のメスの成魚を分割された交配水槽に追加して、一晩でお互いに順応させます。
翌朝、魚をシステム水が入った新しい交配タンクに移し、仕切りを取り外します。魚が交尾して産卵する時間を与えるために15〜30分待ちます。
次に、胚を収集し、ハンクの胚培地が入ったシャーレに保管します。プロトコル全体で摂氏28.5度でそれらを成長させます。解剖顕微鏡で胚の形態を調べます。
あなたはいくつかの発達上の特徴を観察するでしょう。胚盤の切断は、複数の細胞を生じさせます。胚盤葉は、卵黄細胞の上にある逆さまのカップの形をしています。同軸中胚葉セグメントは、胚の背側部分などに発生します。
受精後24時間を超えると、胚を全身の長さで並べ替えるだけです。このプロトコル例では、トランスジェニックmCherryレポーターフィッシュの交配を設定し、得られた胚を選別します。
- まず、胚を生後3ヶ月まで培養します。これは生殖成熟期です。胚収集の前夜に、2匹の成魚と3匹の雌魚を所望の系統から淡水の分割交配タンクに分離します。翌朝、ライトが点灯したら、仕切りを取り外し、水槽の底で胚が観察されるまで魚が自然に交尾するのを待ちます。
30分間隔で胚を収集し、必要な数が収集されるまで胚培地のシャーレを分離します。胚を病期分類するには、10cmのペトリ皿あたり50〜75個のグループで培養し、すべての胚の一貫した発生タイミングを促進します。次に、プレートを摂氏28.5度に保ちます。
分節化後から受精後約24時間までの体節数(HPF)を用いて胚の年齢を測定し、発生年齢に基づいて胚を分離します。
本記事では、胚の発育段階に焦点を当てた、魚類の交配および胚採取のプロトコルについて概説します。魚の馴化、胚の採取、および形態学的検査に関する詳細な手順を説明します。
ゼブラフィッシュ胚の正確な発生および発生段階の決定は、同期させた生物学的材料を必要とする探索段階の研究において不可欠です。本プロトコルにより、定義された段階の胚を確実に単離することが可能となり、トランスジェニック解析や定量的な遺伝子発現プロファイリングなどのダウンストリームへの応用が支持されます。胚のステージングを標準化することで、初期探索および前臨床研究パイプラインにおける予測の信頼性と再現性が向上します。
本手法は、早期創薬と前臨床ワークフローの接点に組み込まれており、遺伝学的、分子生物学的、および表現型解析に適した、ステージを揃えた高品質な胚を提供します。
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最終更新:29 8月 2026