交配と卵のステージング:胚を生成し、発生段階ごとに選別する方法

0 views • 2:52 min • April 30th, 2023

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- まずは交配水槽、卵が落ちるように取り外し可能なインサート付きの水槽からスタートします。胚収集の前の夕方に、2匹のオスと3匹のメスの成魚を分割された交配水槽に追加して、一晩でお互いに順応させます。

翌朝、魚をシステム水が入った新しい交配タンクに移し、仕切りを取り外します。魚が交尾して産卵する時間を与えるために15〜30分待ちます。

次に、胚を収集し、ハンクの胚培地が入ったシャーレに保管します。プロトコル全体で摂氏28.5度でそれらを成長させます。解剖顕微鏡で胚の形態を調べます。

あなたはいくつかの発達上の特徴を観察するでしょう。胚盤の切断は、複数の細胞を生じさせます。胚盤葉は、卵黄細胞の上にある逆さまのカップの形をしています。同軸中胚葉セグメントは、胚の背側部分などに発生します。

受精後24時間を超えると、胚を全身の長さで並べ替えるだけです。このプロトコル例では、トランスジェニックmCherryレポーターフィッシュの交配を設定し、得られた胚を選別します。

- まず、胚を生後3ヶ月まで培養します。これは生殖成熟期です。胚収集の前夜に、2匹の成魚と3匹の雌魚を所望の系統から淡水の分割交配タンクに分離します。翌朝、ライトが点灯したら、仕切りを取り外し、水槽の底で胚が観察されるまで魚が自然に交尾するのを待ちます。

30分間隔で胚を収集し、必要な数が収集されるまで胚培地のシャーレを分離します。胚を病期分類するには、10cmのペトリ皿あたり50〜75個のグループで培養し、すべての胚の一貫した発生タイミングを促進します。次に、プレートを摂氏28.5度に保ちます。

分節化後から受精後約24時間までの体節数(HPF)を用いて胚の年齢を測定し、発生年齢に基づいて胚を分離します。

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Last updated: 18 July 2026