骨髄由来樹状細胞の作製:マウス骨髄から樹状細胞を作製する方法

- 樹状細胞またはDCは、T細胞を活性化する重要な抗原提示細胞です。白血病患者では、これらの細胞は腫瘍関連抗原の発現が不十分であり、抗原特異的免疫応答を誘発できません。樹状細胞は骨髄に豊富にあります。したがって、骨髄は、癌におけるそれらの役割を研究するのを助けるために、彼らの分離のための好ましい部位です。

樹状細胞を取得するには、安楽死させたマウスの大腿骨または脛骨から骨髄を抽出し、培地充填シリンジを使用して骨髄を洗い流します。ペレットを遠心分離し、塩化アンモニウム-カリウムまたはACK緩衝液に再懸濁して赤血球を溶解します。次に、溶解を停止し、遠心分離するために培地を追加します。抗生物質を含む培地にペレットを再懸濁します。顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子またはGM-CSFを添加し、細胞懸濁液をペトリプレートに移します。

プレートを希望の時間インキュベートします。GM-CSFは、前駆細胞が樹状細胞に分化するのを助けます。最後に、樹状細胞の表面受容体に結合するリポ多糖またはLPSで細胞を活性化し、完全に成熟した免疫原性の骨髄樹状細胞を作製します。このプロトコルでは、マウスの骨髄からの樹状細胞の生成を実証します。

- 骨髄由来樹状細胞を作製するには、示されているように、野生型または第B因子ノックアウトマウスの大腿骨から骨髄を単離し、赤血球を5ミリリットルのACK溶解緩衝液で溶解し、10ミリリットルのRPMIで反応を停止し、5分後に1%FBSを補充します。

遠心分離により全血球を採取した後、ペレットを10ミリリットルの培養培地に再懸濁し、10×10の2倍から6細胞/ミリリットルの濃度に再懸濁し、GM-CSFの1ミリリットル当たり20ナノグラムを細胞に加える前に、10ミリリットルの細胞を摂氏37度と二酸化炭素5%の個々の100×15ミリメートルのペトリ皿に6日間播種する。6日目に、プレートあたりLPSのミリリットルあたり25マイクログラムで骨髄由来樹状細胞培養を活性化します。