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粘着テープベースのサンプリングと蛍光の組み合わせその場でハイブリダイゼ...
粘着テープベースのサンプリングと蛍光の組み合わせその場でハイブリダイゼ...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

粘着テープベースのサンプリングと蛍光の組み合わせその場でハイブリダイゼーションサルモネラ生鮮食品について

Full Text
13,551 Views
09:10 min
October 18, 2010

DOI: 10.3791/2308-v

Bledar Bisha1, Byron F. Brehm-Stecher2

1Center for Meat Safety and Quality, Department of Animal Sciences,Colorado State University, 2Rapid Microbial Detection and Control Laboratory, Department of Food Science and Human Nutrition,Iowa State University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes a method for sampling the surfaces of fresh produce, such as tomatoes, using adhesive tape. It enables rapid detection of Salmonella through fluorescence in situ hybridization (FISH).

Key Study Components

Area of Science

  • Microbiology
  • Food Safety
  • Molecular Biology

Background

  • Salmonella is a significant foodborne pathogen.
  • Traditional methods for detecting Salmonella can be time-consuming.
  • Fluorescence in situ hybridization (FISH) allows for rapid detection.
  • Adhesive tape sampling is a novel approach for surface sampling.

Purpose of Study

  • To develop a simple method for sampling fresh produce surfaces.
  • To enable rapid molecular detection of Salmonella.
  • To improve food safety protocols in produce handling.

Methods Used

  • Application of adhesive tape to collect surface-bound cells.
  • Cell fixation and dehydration in an ethanol series.
  • Hybridization using a Salmonella-specific oligonucleotide probe cocktail.
  • Washing and analysis of samples via fluorescence microscopy.

Main Results

  • Successful extraction of Salmonella from fresh produce surfaces.
  • Rapid detection achieved through FISH methodology.
  • Demonstrated effectiveness of adhesive tape sampling.
  • Potential for enhancing food safety measures.

Conclusions

  • The adhesive tape method is a viable option for sampling.
  • FISH provides a rapid detection technique for pathogens.
  • This approach can be integrated into food safety practices.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of using adhesive tape for sampling?
Adhesive tape allows for easy collection of surface-bound cells without complex equipment.
How does FISH work in detecting Salmonella?
FISH uses fluorescent probes that bind specifically to Salmonella RNA, allowing for visualization under a microscope.
Can this method be applied to other types of produce?
Yes, the adhesive tape sampling method can be adapted for various fresh produce surfaces.
What are the limitations of this method?
Potential limitations include the need for careful handling to avoid contamination and the specificity of the probes used.
Is prior knowledge of microbiology required to perform this protocol?
Basic understanding of microbiological techniques and safety protocols is recommended.
How long does the entire process take?
The entire sampling and detection process can be completed in a few hours, making it relatively quick.

このプロトコルは、急速な細胞全体の検出に続いてトマトや他の生鮮食品の表面のサンプリングのための簡単​​な粘着テープベースのアプローチを、説明して

この手順の全体的な目標は、粘着テープによる生鮮食品のサンプリングと、魚としても知られるC 2ハイブリダイゼーションの急速蛍光を使用したサルモネラ菌の全細胞分子検出を組み合わせることです。これは、最初に目的の材料に粘着テープを貼り付け、表面結合細胞を抽出することによって達成されます。セル電荷テープは、直接分析することも、固相または液相濃縮にかけることもできます。

手順の2番目のステップは、テープ上で、ブロスに言及または濃縮された細胞のエタノールシリーズでの自己固定および脱水です。第2ステップでは、細胞を懸濁液中で固定し、続いて保存バッファー中での細胞のResus懸濁液を調製します。手順の第3ステップは、サルモネラ菌特異的オリゴヌクレオチドプローブカクテルを使用してテープハイブリダイゼーションステップを迅速に実行し、続いてファックスを介して分析されたサンプルの洗浄バッファーリンスによる過剰なプローブの除去を行うことであり、魚のステップは懸濁状態で行われ、分析前に単純な希釈ステップを使用して余分なプローブを除去してもよい。

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免疫学 問題44 サルモネラ 粘着テープ 迅速な検出 生鮮食品 蛍光in situハイブリダイゼーション 蛍光顕微鏡 フローサイトメトリー

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