細胞生物学の勾配を生むマイクロ流体デバイス

私の名前は江です。私はハーバード大学とMITのヘルス、サイエンス、テクノロジーのポスターフェローです。私の名前はアミール・マンチで、ハーバード大学MITの健康科学・技術部門の学部

このスライドは、シリコン蒸気の上にSUA 50スピンコーティングを施し、シリコン蒸気の上にマスクをさらに配置し、uuv露光して現像するデバイスの作り方を示しています。私たちはついに、シリコーン蒸気の上にこれらのパッドを置くことができます。その後、PDMSをキャストし、クロールしてベーキングし、少しパンチを効かせて、酸素プラズマを使用してPDMSデバイスとストレートのグラッセとの間のボン

さて、私たちは今、研究室内の微細加工室にいて、いくつかのPDMSレイヤーを作ることから始めます。PDMSとは、実際の科学用語はポリメチルサボキサンであり、有機ポリマーです。これは、最も広く使用されているシリコンベースの有機ポリマーです。

それは実際には2つの異なるものの混合物であり、シリコンエラストマーベースとシリコンエラストマー硬化剤の混合物です。したがって、比率は塩基の10と硬化剤の1です。約10グラムのベースが必要なので、それに応じて約1グラムのエラストマー硬化剤が必要になり、このベースと硬化剤を互いに着用できるように混合してみます。

ピペットを使います。そこで、混合物の準備ができたので、実際にシリコンウェーハの上に注ぎます。つまり、これらのシリコンウェーハには、その上にいくつかのパターンがあるという考え方です。

彼らは実際にこのPDMSポリマーがパターンを取得するのを助け、私たちはそれらのパターンを使用して、チャネルや溝、またはそれらのポリマーに必要な他のパターンを設定します。次のステップは、この混合物の中にはたくさんの泡があるので、ポリマー内の気泡を避けるために、真空の中に入れてみることです。真空チャンバー内のシリコンウェーハにPDMSゲルを配置します。

チャンバーを閉じて、真空を開けます。気泡がなくなった後、おそらく数分後、摂氏約70度のオーブンに一晩入れて固めます。私が注目していただきたいパターンは、これらの3つの異なる予約戦争を行い、一方の側がゼロの集中を持ち、こちら側の特定の量の集中が、それに向かって均一に移動し、もう一方の端に小さなパンチを打つように勾配を作ることです。 この場合、これが私たちの出口になります。

次のステップは、これらのパターンの1つをカットし、パターンの表面を上にして愛国者の皿に移すことです。ですから、このパターンで説明した3つの入口と1つの出口が見えることを願っています。ポリエチレンチューブを使用できるように、入口には小さなパンチを使用し、予備戦争をするために出口には大きなパンチを使用します。

では、最初の入口から始めます。私はパンチを作るつもりです、2番目のものと同じもの、そしてまた3番目のもののための別の小さなパンチ。最後のステップは、アウトレットで大きなパンチを打つことです。

それで、完了したら、一番上のレイヤーであるA-P-D-M-Sレイヤーがあり、一番下に別のガラスレイヤーを使用します。そして、これらのマイクロスライドは、マイクロフォリックデバイスの私の最下層になります。今、私たちは微細加工室にいて、1つのガラスと1つのPDMS層があり、それらを互いに取り付けたいと考えています。

これから使うのは、プラズマクリーナーという機械です。チャンバー内で何が起こるかというと、プラズマが弱い表面バランスを分解し、反応性の高い化学基に置き換えるのを助け、表面が実際に親水性であることが判明します。今何が起こるかというと、最上層で内部にいくつかのチャネルがあったPDMSの型を取り、型にほこりが付着するのを防ぐために前に置いたテープを取り出します。

チャンバーの中に入れます。次に行うことは、顕微鏡のスライドであるガラス層があり、これがデバイス内の最下層になることです。だから、これもチャンバーの中に置くつもりです。

そして、チャンバーが閉じたら、まず電源を入れてからポンプでチャンバーを完全に閉じ、それから約5分後にこのマシンに戻らなければなりません。私がすることは、マシンの電源を切りたいということです。そこで、最初にポンプをオフにし、次に電源を切って、チャンバーを開けます。

この音は、実際にはチャンバー内のプロセス中に加えられた負圧によるものです。そこで、さまざまなレイヤーを取り出して、それらを一緒に取り付けたいと思います。ガラスは一番下の層なので、左手で持って固定し、PDMSレイヤーをガラスレイヤーの上に置きます。

しかし、実際にはパターンが今上向きになっているので、PDMSレイヤーを反転させます。押し付けてからグラスの上に置きます。それらは非常に簡単に取り付けることができ、このプラズマ処理プロセスの利点の一部は、接着強度と耐久性です。

最後にはそんな感じです。繰り返しになりますが、これらは私たちのインレットであり、これは私のアウトレットにあり、次のステップに進む準備ができています。デバイス内部のファイバー調理、その後インキュベーター用に1時間、その後1時間後にインキュベーターからSIMサンプルを取り出し、魚の培養食品を入れてから溶液を作ります。

EGFソリューションを作るために、私たちはちょうど15ナノグラムあたりEGFと10マイクロモル50 Dは、チャネル全体のEGF勾配を視覚化するためにこのソリューションを実行するだけで、2つのミル培養培地をAzureとして配置します。次に、2ミルメディア、仮想メディアを取り、ここに別の2ミルメディアを配置します。これらの2つは、通常の培養、通常の、通常の培養液のみを装置に注入します。

そこでバブルを外して再度接続すると、こちらもまたMモバイルのバブルが降りてきてきます。そして、15ナノグラムのEGFと10マイクロモルのフィデクストラ、そしてテイクアウトから2ミルの培地を使用し、サンプルをシリンジに入れると、泡がわかります。そして、解決策の切り替え、切り替え直しだけです。

溶液はガス式シリンジに入ってきて、気泡を取り除くために数回SHを押すと、すべてのスイッチシリンジ溶液が最初にここに来て、次にバーと溶液を三方バーを介して切り替え、チューブとチューブから出てくる溶液。そして、混合物の後、溶液が出てきたら、チューブをMy Predictデバイスに挿入するだけで、3つの溶液はすべて同じになります。あなたはただ穏やかに接続し、注入チャネルのネットを接続することができます。

では、最後に2つは通常の文化メディアです。1つは、EGFを使用した文化培地であり、EGFの勾配プロファイルを確認することです。これはネットのセル、ネットのセルです。

これによりセルアウトレットになるので、3つのハブチャネルを使用してグラデーションを生成し、セル領域内にグラディッドを生成します。だから、通常、私が望むのは、ただセルの着座、細胞の懸濁液、出口の着座を行い、その後、ネットで優しく吸引することができ、その後、セルがセル領域を流れ、自動的に座って、コーティングを落ち着かせ、その後、細胞が完全に広がることを確認します。そして、作製後、細胞が完全に広がっていることを確認した後、私たちはただ注入を開始し、その後、無線発生装置を使用して細胞の移動を研究することができます。