細胞挙動を研究するための溝パターンを用いたマイクロ流体デバイス

我々は、細胞の捕獲と文化を可能にすることができるマイクロ流体デバイスの作製のためのプロトコルについて説明します。このアプローチではこのようなマイクロ流体チャネル内の溝のようなパターン化された微細構造は、セルがドッキングすることができる内に低せん断応力領域を作成するために使用されています。

私の名前は江姜で、ハーバード大学とMITの健康、科学、技術のポスターフェローです。ですから、この研究室での私の専門知識は、細胞の挙動を研究するための新しい予測デバイスを生成することができます。私は非常に新しい勾配デバイスを生成するだけでなく、予測デバイスに積分を生成することもできます。

TCデバイスは、細胞の相互作用と細胞の相互作用、および細胞の太陽因子の接触を正確に操作できます。ですから、TCシステムを使用して、基本的な細胞生物学を理解するだけでなく、発生生物学やバイオバイオ幹細胞バイオエンジニアリングを適用するために勉強することができます。私の名前はアミール・マンチで、ハーバード大学のMIT健康科学技術部門のハーン研究室の学部生です。

また、私はマイクロフィリックデバイスに取り組んでおり、マイクロ流体デバイスが細胞を培養するための優れた可能性を秘めたデバイスであることを示す原理の証明として、毒性研究などのさまざまな研究を行い、これらのデバイス内の流体特性を流量の関数として研究し、最適化しようと試みてきました。 ジオメトリおよびその他のさまざまな種類のパラメーター。現在、私たちはマイクロファブリケーションルームから始めており、マイクロフォリックデバイスを実現するためには、シリコンウェーハパターンと、その上にPDMSモールドが必要で、マイクロ流体デバイスを作ろうとしています。このPDMSポリマーは、実際には2つの異なるものが混ざり合っています。

これは、シリコンエラストマーベースとシリコンエラストマー電流剤の混合物です。これら2つを混合する方法は、10対1の比率で混合するため、塩基の10と硬化剤の1つです。今、私はここに私のベースの約20グラムが欲しいです。

また、2グラムの硬化剤が必要で、硬化剤の密度ははるかに低いです。もっと早く来るから、少し注意しないといけない。だから今は約22個で、ベースと硬化剤を一緒に混ぜたいと思います。

だから、それを行うのはパイプを使用します。できるだけうまく混ぜてみます。このPDMSポリマーを、実際にパターンが描かれているシリコンウェーハの上に注ぎ込み、シリコンウェーハがPDMSモールドにパターンを与えるのに役立ちます。

実は、ここには2つのシリコンウェーハがあり、その理由は、そのうちの1つはマイクロフィリックデバイスの最上層用で、もう1つは最下層用であることに気づくでしょう。マイクロフィリックデバイスには2つの層が必要ですが、それは内部にチャネルを持とうとしているからです。マイクロ流体デバイスの背後にある全体的な話は、それらのチャネル内に流れを持ちたいということです。したがって、この混合物の中にはたくさんの泡があるため、この混合物を両方のシリコンウェーハの上に注ぐ必要があります。

私はこれらの泡を取り除きたいのですが、私たちは真空を使ってその泡を取り出すのです。先ほどお話ししたように、PDMS混合物の中にはたくさんの気泡があり、それを取り除きたいので、真空チャンバー内のシリコンウェーハの上に混合物を置きます。チャンバーを閉じて真空を開けます。これが終わったら、PDMSの型をオーブンで一晩中入れて、より固くします。

さて、私たちは今実験室にいて、これらのマイクロ葉葉デバイスを組み立てたいと思います。私たちがやろうとしていることは、インキュベーター内に一晩置かれたPDMSの型を取り、それらが形成され、シリコンウェーハ上にあったパターンを形成し、私は2つの異なるパターンを使用するということです。左側には最上層となるマイクロチャネルが見え、右側には最下層となる緑色の線パターンがいくつか見えます。

そして、これは、マイクロデバイスの内部に溝を形成するということです。私は、シリコンウェーハから簡単にバラバラになるように、最上層を持つことができるように、これらのゲルをカットすることから始めています。そして、私が行うことは、パターンが上を向くように、それをこれらのペトラ皿に表向きに転写することです。

そして、緑のラインパターンであった溝についても同じことを試してみます。つまり、これらが最下層を形成することになります。そこで、ゲルをカットしたら、ペトラ皿に移し、パターンの上にほこりが付くのを防ぐために、テープで留めます。

次のステップは、細胞とメディアが流入および流出するように、チャネルの端をパンチすることです。私がやろうとしていることは、ここの表面が広く、自分でパターンを見ることができないので、これを使用してチャネルが見えるようにし、両端をパンチすることです。だから、ここで大きなパンチを打ち込むので、予約注文ができるようにし、反対側では、反対側でポリエタノールチューブを使用できるように小さな穴を開けます。

私たちは現在、微細加工室にいますが、次のステップは、私たちが持っている2つの異なる表面を取り付けることです。そのために、プラズマクリーナーと呼ばれるこの機械を使用し、そのプロセスはプラズマ処理と呼ばれています。このチャンバー内で何が起こるかというと、プラズマ環境が起こり、プラズマ表面の相互作用で何が起こるかというと、プラズマが実際に弱い表面バランスを壊し、反応性の高い化学グループで置き換え

そこで、これから何が起こるかというと、埃を防ぐためにここに置いたテープを取り出し、これらの型をチャンバーの中に入れるのです。このドアを完全に閉め、最初に電源を入れ、次にポンプでポンプを動かして、準備が整います。5分から10分でピックアップします。

今、私はそれをオフにしたいので、ポンプと電源をオフにして、私はチャンバーを開きます。実はここには負圧があるので、音が聞こえるかもしれません。それが、負圧のせいで、ゆっくりと型を取り出します。

両方のパターンサーフェスが上を向いているので、最下層を左手に置き、最上層を反転させて溝の上に置き、その上のレイヤーを互いに押し付けます。接着力と耐久性が、このプラズマ処理装置を使用する利点です。そして、今ここで見ているのは、実際には最上層のチャネルを見ることができ、最下層の溝付きパターンを見ることができ、次のステップに進む準備ができているということです。

そして、このカルチャールーム、このカルチャーフード、そしてオープンドアディッシュを持ってきてください。そして、フィブロネクチンをロードし、60マイクロリットルのフィブロインを取り出して、デバイスにロードするだけです。そして、デバイス内部に何らかの流れを発生させるために、チャネルの内側の振動を小さなコーティングに誘導するために、出口を穏やかに吸引することができます。

その後、このデバイスをインキュベーターに置くだけで、インキュベーター内の振動を冷却する1時間後です。インキュベーターからサンプルを取り出し、その後、5つの錆、3つ、3つの繊維錆を使用します。フュージョンとディスシェードを送り、メディアを入れてから、セルカウンターを使用してセルカウンティも行います。

私たちは通常、デバイスの中に座っている都市の百万セルのプレミアです。したがって、解離後、シャンプーを数回押して販売懸濁液を取り出し、チャネルの内側にロードして、チャネル内のセルをロードするだけで済みます。吸引器を使って優しく流れるだけです。

合計媒体と表面懸濁液は、出口セルを介して吸引され、一般的に自動的に、選択的なグローバルチャネルを播種します。その後、インキュベーターを分解して1時間、細胞が完全にチャネル内に広がるまで分解できます。そして、アネックシングファイブとプロップヨウ化物、そして過酸化水素を注入するだけです。

そして、あなたの時間仮説アッセイを研究します。私たちは、組織培養食品の内部にサンプルを採取し、その後、溶液2ミルDM DMM培地だけでなく、20マイクロリットルの付属物5つの40マイクロリットルのプロップヨウ素、100ミリの過酸化水素を作ることができます。そして次に、付録5、プロップヨウ化物、ハイドロパーサイドを備えた2メートルのメディアメディアを取り、その後にシリンジを置きます。

2つのミルメディアと付録5つのプロップヨウ化物、ハイドロパーサイドを置きます。溶液を天井の内側に置き、気泡を取り出してからCベアを接続するだけです。これは、ハミルトンの暖かいミルの天井に密着したものです。

これは3匹のクマです。これは使い捨ての天井天井です。こちらは27ゲージの針です。

これはPE20ポリチューブです。シリンジの中に溶液を入れた後、フルタイムでフルにプッシュし、フルプッシュしてプッシュし、時にはチップをタップすることで、シリンジを軽くたたいて気泡を取り除き、溶液をプルすることができます。したがって、もう一度、完全に押して、泡を取り外してから、再び穏やかにプログラムします。

したがって、1回の食事に解決策を取り、その後、バルブを切り替えることができます。三方弁を通して溶液を押し、チューブ内に完全に押し込みます。そこで、最終的に解決策として、チューブの先端から出て、チューブをマイクロデバイスに接続し、1分間に1マイクロの注入を開始することができます。