JoVE 実験百科事典
がん研究
0 回視聴 • 2:10 分 • April 30th, 2023
シングルセルサンプリングにより、がん細胞の懸濁液から単一の生細胞を単離して、下流の分析を行うことができます。
がん細胞懸濁液から分離を開始します。この懸濁液の所望の量をスライドガラスに移します。粒子の動きを減らし、細胞を沈殿させるために、スライドをしばらく邪魔しないままにしてくれます。
次に、マイクロキャピラリーチップに接続されたマイクロマニピュレーターを備えた顕微鏡下でスライドを移します。この高精度機器は、微視的なレベルでサンプル中の細胞との物理的相互作用を促進します。
マイクロキャピラリーチップを単一の標的細胞に近づけます。吸引を加えることにより、標的細胞を微小毛細管に集めます。次に、マイクロキャピラリーを目的の収集バッファーを含むチューブに直接移します。
マイクロキャピラリー内容物を排出して、捕捉された単一細胞をバッファーに放出します。分離された生きた単一細胞を、さらなる分析まで氷上に保存します。
マイクロマニピレーションの場合は、100マイクロリットルの細胞懸濁液全体をスライドガラスに移します。次に、スライドガラスをマイクロマニピュレーターを備えた顕微鏡に置き、細胞を5分間沈殿させます。次に、0.2ミリリットルのPCRチューブで、2マイクロリットルの細胞溶解マスターミックスをピペッティングし、氷上に移します。マイクロマニピュレーターを使用して、1マイクロリットルの1Xリン酸緩衝生理食塩水に単一細胞を収集します。
次に、細胞を2マイクロリットルの細胞溶解マスターミックスに直接移します。デスクトップマイクロフリージを使用して、サンプルを2000 x g で3秒間すばやく回転させ、チューブの底に液体を回収します。