レーザーキャプチャーマイクロディセクションとは何ですか？

レーザーを使用して混合物から特定の細胞を分離する技術です。

UV光はこのプロセスをどのように支援しますか？

UV光はスライドをより親水性にし、細胞の付着を改善します。

サイトセントリフュージョンの役割は何ですか？

スライド上の単層に細胞を集中させ、より簡単な解剖を可能にします。

この方法はどのような種類の細胞に使用できますか？

はい、細胞がスライドに付着し、レーザー解剖に適している限り。

分離された細胞の応用は何ですか？

分離された細胞は、遺伝的および生化学的研究を含む様々な分析に使用できます。

レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを使用したシングルセルサンプリング:不均一な細胞集団から標的細胞を回収する技術

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 views • 2:30 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

レーザーキャプチャマイクロダイセクションは、スライドガラス上に調製された細胞混合物から単一の標的細胞を調達するのに役立ちます。まず、表面に紫外線透過性の生化学的に不活性な膜でコーティングされた適切なスライドガラスを取ります。スライドを紫外線にさらして親水性を高め、細胞の接着性を高めます。

スライドを細胞遠心分離装置に組み立てます。装置の漏斗ポートに細胞懸濁液を追加します。細胞遠心分離機は、遠心力を集中させ、スライドガラス上の小さな領域に細胞の単層を沈着させます。スライドを自然乾燥させます。

スライドをサンプル面を上にして、レーザー顕微解剖顕微鏡の下に置きます。対象のセルを囲む領域を定義します。次に、レーザービームを集中させて、膜コーティングとともに標的細胞を含む領域を解剖します。次に、レーザービームの焦点をぼかし、パルスして圧力を発生させます。このエネルギーは、顕微解剖領域を、スライドの上に配置されたバッファーを含む事前に組み立てられた収集チューブの逆キャップにカタパルトします。

チューブを取り出し、キャップを閉めます。チューブを回転させて、単一の標的細胞を含むバッファーをチューブの底に持っていきます。さらに分析するまでチューブを冷蔵します。

レーザーマイクロコダイセクションでは、300マイクロリットルの細胞懸濁液全体を300 x g のメンブレンコーティングスライドに5分間細胞遠心分離します。次に、膜でコーティングされたスライドをレーザーマイクロコダイセクションが可能な顕微鏡に置きます。次に、4.5マイクロリットルの細胞溶解マスターミックスを0.2ミリリットルのPCRチューブのキャップにピペットします。

キャップをサンプルの上に置き、レーザーマイクロダイセクションによって単一の細胞を採取します。その後、PCRキャップに単離された細胞がないか確認します。レーザー顕微鏡検査顕微鏡からPCRチューブを取り外し、チューブを閉じます。チューブの底にあるすべての液体を短時間で回収します。