レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを使用したシングルセルサンプリング:不均一な細胞集団から標的細胞を回収する技術

レーザーキャプチャマイクロダイセクションは、スライドガラス上に調製された細胞混合物から単一の標的細胞を調達するのに役立ちます。まず、表面に紫外線透過性の生化学的に不活性な膜でコーティングされた適切なスライドガラスを取ります。スライドを紫外線にさらして親水性を高め、細胞の接着性を高めます。

スライドを細胞遠心分離装置に組み立てます。装置の漏斗ポートに細胞懸濁液を追加します。細胞遠心分離機は、遠心力を集中させ、スライドガラス上の小さな領域に細胞の単層を沈着させます。スライドを自然乾燥させます。

スライドをサンプル面を上にして、レーザー顕微解剖顕微鏡の下に置きます。対象のセルを囲む領域を定義します。次に、レーザービームを集中させて、膜コーティングとともに標的細胞を含む領域を解剖します。次に、レーザービームの焦点をぼかし、パルスして圧力を発生させます。このエネルギーは、顕微解剖領域を、スライドの上に配置されたバッファーを含む事前に組み立てられた収集チューブの逆キャップにカタパルトします。

チューブを取り出し、キャップを閉めます。チューブを回転させて、単一の標的細胞を含むバッファーをチューブの底に持っていきます。さらに分析するまでチューブを冷蔵します。

レーザーマイクロコダイセクションでは、300マイクロリットルの細胞懸濁液全体を300 x g のメンブレンコーティングスライドに5分間細胞遠心分離します。次に、膜でコーティングされたスライドをレーザーマイクロコダイセクションが可能な顕微鏡に置きます。次に、4.5マイクロリットルの細胞溶解マスターミックスを0.2ミリリットルのPCRチューブのキャップにピペットします。

キャップをサンプルの上に置き、レーザーマイクロダイセクションによって単一の細胞を採取します。その後、PCRキャップに単離された細胞がないか確認します。レーザー顕微鏡検査顕微鏡からPCRチューブを取り外し、チューブを閉じます。チューブの底にあるすべての液体を短時間で回収します。

• Microdissection - The process of extracting a single cell from a mixed cell population.
• Cytocentrifuge Technique - A method which uses centrifugal force to focus cells onto a slide.
• Target Capture - The retrieval of a specific designated cell from a slide.
• Laser Capture Microdissection Microscope - An instrument purposed to select and extract a target cell from a tissue section.
• Cytocentrifugation Meaning - The connotation of concentrating and depositing cells on a slide using centrifugal force.

• The concept of microdissection entails selecting and isolating a specific cell from a mix (e.g., target capture).
• Cytocentrifuge technique is a process employing centrifugal force to deposit cells on a slide (e.g., cytocentrifugation).
• Laser capture microdissection microscope allows for precise selection and extraction of target cells (e.g., microdissection).
• In context with the experiment, these principles are implemented to isolate a single target cell on a slide for further analysis.

• What does microdissection entail and what role does target capture play in it?
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• Microdissection has practical applications in cell study and genome research (e.g., biotechnology).
• These techniques contribute to the clinical and research aspects of healthcare industry (e.g., pathology).
• Isolation of specific cells has broader implications for disease understanding and treatment (e.g., cancer research).
• Advancements in efficient cell isolation techniques drive scientific innovation in cell and genome studies.