過ヨウ素酸シッフまたはPAS染色:糸球体の構造変形を評価する方法

糸球体は腎臓内の毛細血管の複雑なネットワークであり、老廃物をろ過し、血液から余分な水分を除去します。腎濾過率はこの特殊な構造に依存しており、過ヨウ素酸シッフ染色またはPAS染色を使用して検査できます。

まず、スライドガラス上でパラフィン化された腎皮質切片を採取します。スライドをキシレンで処理します。キシレン分子は、組織切片からパラフィンワックスを溶解します。次に、試料を濃度の低下するアルコールにさらします。アルコールは微量のキシレンを除去し、その後の染色の結合のために組織切片を再水和します。

次に、標本に過ヨウ素酸を加えます。過ヨウ素酸は、グリコーゲンやムチンなどの組織多糖類に存在するジオールをアルデヒドに変換します。これらのアルデヒドは、フクシンと亜硫酸の組み合わせであるシッフ試薬と反応し、組織切片を染色するマゼンタ色の染料を形成します。スライドをすすぎ、余分な汚れを取り除きます。

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すぎ後、DNAに結合して紫色に染色する核対比染色剤である鉄ヘマトキシリンを加えます。余分な汚れを取り除くために洗ってください。最後に、アルコールの強度を上げて試料を脱水し、続いて透明剤として機能するキシレンを脱水します。このステップは、顕微鏡検査のための組織切片のコントラストを改善するのに役立ちます。

糸球体疾患は、基底膜の肥厚、毛細血管の変化、および腎機能障害に関連する異常な細胞として視覚化できます。

糸球体細胞とメサンギウムマトリックスの詳細な視覚化のために、固定パラフィン包埋腎皮質サンプルを摂氏37度で1時間乾燥させた後、連続したキシレンと下降エタノール浸漬で脱パラフィン化します。サンプルを蒸留水中で5分間再水和し、ヒュームキャビネット内の過ヨウ素酸溶液でスライドをインキュベートします。

5分後、スライドを100ミリリットルの蒸留水で5分間の洗浄を3回行い、続いてシフ試薬で15分間インキュベートします。インキュベーションの最後に、スライドを流水水で5分間洗浄し、ヘマトキシリンで3秒間対比染色してから、流水水でさらに15分間完全にすすいでください。

次に、エタノール浸漬と3分間のキシレン浸漬

を2回連続してスライドを脱水します。空気乾燥後、スライドをキシレンベースの封入剤でマウントして、400倍の倍率の光学顕微鏡で糸球体構造を評価できます。