絹コラーゲンを用いた分極神経組織の人工3Dモデルの開発

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ドーナツ型のポリ-D-リジンでコーティングされた多孔質シルク足場をマルチウェルプレートに入れます。

培養培地を添加して足場を水和し、細胞の付着を促進します。

余分な媒体を吸引します。足場に神経細胞懸濁液を播種し、インキュベートします。

コーティングされた表面と足場の細孔は、高密度の細胞付着のための大きな表面積を提供し、効率的な栄養素と老廃物の拡散を促進します。

付着していない細胞を取り除き、細胞外マトリックスタンパク質であるコラーゲンを加えます。

コラーゲン重合のためにインキュベートします。このプロセスにより、多孔質足場上のゲル状の 3D マトリックス内に細胞が埋め込まれます。

メディアを追加します。培養し、定期的に培地の半分を交換して、細胞を乱すことなく栄養素を補充します。

培養内では、神経細胞体は絹足場に固定されたままであり、軸索はコラーゲンマトリックスを介して成長し、3D軸索ネットワークを形成します。

この区画化された細胞体と軸索の局在化により、3D脳のような偏光神経組織モデルが形成されます。

細胞培養フード内に、滅菌鉗子、細胞培養培地、およびオートクレーブ滅菌した足場のペアを置きます。96ウェルプレートを包装から取り出し、中に入れます。足場を播種するには、まず、ウェルごとに1つの滅菌足場を96ウェルプレートに入れます。細胞培養培地を加えて足場を浸漬し、組織培養インキュベーターで摂氏37度でインキュベートして少なくとも30分間平衡化します。

インキュベーション後、足場から余分な培地を吸引します。次に、足場あたり100マイクロリットルの神経基底培地中の6つのラット皮質ニューロン細胞に2倍10を加えます。プレートをインキュベーターに戻し、細胞が足場に付着するまで一晩放置します。翌朝、付着していない細胞を注意深く吸引し、200マイクロリットルの新鮮な細胞培養培地と交換します。摂氏37度で短時間インキュベートします。

次に、ウェルから培地を吸引します。滅菌鉗子を使用して、細胞を含む足場を96ウェルプレートの空のウェルに移します。次に、各足場に、100マイクロリットルの希釈したばかりの氷冷3ミリグラムのラットテールコラーゲン溶液を加えます。

細胞を摂氏37度のインキュベーターに戻して、コラーゲンを30分間重合させます。インキュベーターからプレートを取り出し、ウェルあたり100マイクロリットルの予熱細胞培養培地を加えます。プレートをインキュベーターに戻し、細胞増殖の希望の期間、各ウェルの培地の半分を毎日新鮮な培地に交換します。

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Last updated: 18 July 2026