オリゴデンドロサイト馴化培地の生成方法

ポリマーでコーティングされたシャーレを取ります。

オリゴデンドロサイト系統またはOL細胞を適切な培地に加え、インキュベートします。

ポリマーコーティング上の正電荷は負に帯電した細胞膜を引き付け、皿への細胞の付着を強化します。培地中の成長因子と栄養素は細胞増殖を促進します。

培地を栄養価の低い培地と交換し、インキュベートします。

栄養レベルが低いと、細胞に軽度のストレスが誘発され、タンパク質、脂質、成長因子やサイトカインなどのその他の分子が細胞外空間に分泌されます。

培地をチューブに集めます。

フィルター

で培地を滅菌し、細胞の破片や不溶性成分を除去します。

OL細胞から分泌される可溶性生理活性分子を含む濾液は、オリゴデンドロサイト条件培地またはOCMと呼ばれます。

タンパク質やその他の分子の分解を防ぐために、OCM をさらに使用するまで低温で保管し、OCM の有効性を維持します。

2つまたは3つのプレコートされた100ミリメートルのペトリ皿に10ミリリットルの細胞懸濁液をプレートします。

2012年20月37日、摂氏5度の加湿インキュベーターでインキュベートします。

無

菌条件下の層流フードで、培地を10ミリリットルの温かいMbb 27低培地で更新します。

2%の

二酸化炭素の下で摂氏37度の加湿インキュベーターで5日間インキュベートします。

OCMを採取するには、オリゴデンドロサイト分泌因子を含む上清を採取します。0.22ミクロンのフィルターを使用してOCMをフィルター滅菌します。