イオン選択的およびイオントフォレーシス微小電極を用いた脳切片の細胞外空間の特性評価

人工脳脊髄液または aCSF に浸された安全な厚い脳スライスを含む記録チャンバーから始めます。

この脳スライスには間質液と細胞外マトリックスが含まれており、脳細胞を取り囲む相互接続された細胞外空間を形成します。

デュアルチャネルイオン選択性微小電極とイオン導入微小電極をaCSFに沈

めます。

デュアルチャネルイオン選択性微小電極は、テトラメチルアンモニウムまたはTMAイオンのセンシングチャネルとリファレンスチャネルを備え、イオン導入微小電極にはTMA溶液が含まれています。

イオン導入電極はTMAイオンを放出し、イオン選択性微小電極に向かって拡散します。

センシングチャネルはこれらのTMAイオンを検出し、電気信号を生成します。これをベースラインとして記録します。

両方の電極を脳スライスに挿入し、少し離します。

TMAイオンが細胞外空間を拡散すると、イオン選択性微小電極に到達します。

信号を再記録し、ベースラインと比較して、体積分率やねじれの程度などの細胞外空間特性を分析します。

厚さ 400 マイクロメートルの脳スライスを記録チャンバーに入れ、流れる ACSF に完全に沈められるようにします。次に、イオン導入微小電極とISMの両方を脳スライスの関心フィールドの上に移動させます。両方の電極を流れるACSFに沈めますが、スライスの上に沈めます。次に、リファレンスチャネルとイオン検出チャネルの両方の電圧を0ミリボルトにオフセットします。両方のチャネルの電圧が安定するまで待ちます。

チャートレコーダーで、ISMのイオンセンシングチャネルで測定された電圧をマークします。次に、ISMとイオン導入の微小電極をスライスの深さ200マイクロメートル、互いに120マイクロメートル離して配置します。流れるACSFと脳で測定されたTMA信号間の電圧差を計算し、この値をWanda GUIの測定電極ボックスのベースラインボルトミリボルトフィールドに入力します。

GUI の左側で、すべての実験パラメータが正しく入力されていることを確認します。[取得] をクリックして記録を開始し、完全な記録を許可します。両方の微小電極をスライスから移動させた後、チャートレコーダーを使用して、現在測定された電圧と以前の測定値との間の変化を判断します。