背根神経節注射と背根挫傷傷を用いたラットの感覚軸索再生のモデル化

麻酔をかけたラットから始めます。

頸椎 C2 椎骨と胸椎 T2 椎骨の間に正中線の皮膚切開を行います。

次に、白色の線維組織の正中線に沿って切開し、最初の筋肉層を引っ込めます。

第2筋層の正中線で薄い膜組織を解剖し、横紋縦筋を引っ込めます。

最後に、3番目の筋肉層を切開して脊柱を露出させます。

左のC4からT1椎骨を覆う椎弓根とペディクルを取り除き、C5からC8の後根神経節またはDRGを明らかにします。

換えアデノ随伴ウイルス懸濁液をDRGに注入します。

このウイルスは、軸索の再生を助ける成長促進タンパク質をコードしています。

鉗子を使用して、C5 から C8 の後根を押しつぶして、DRG から脊髄への軸索接続を切断し、制御された軸索損傷を引き起こします。

このモデルは、ウイルスを介した軸索再生を研究する準備ができています。

皮膚上の顕著な C2 および T2 棘突起を見つけることから手術を開始します。次に、10番のメスを使用して、C2とT2棘突起の間に皮膚切開を行います。皮膚を開くと、ゼリーのような質感を持つ筋肉の最初の層に白い線維組織の正中線が見えるはずです。

白い正中線に沿って筋肉の最初の層に同様のサイズの切開を行います。そこ近くに主要な血管があるため、顕著なT2棘突起を超えないでください。2 つのリトラクター (1 つは吻側に配置され、もう 1 つは尾側に配置され) を使用して、筋肉の最初の層を引っ込めます。

横紋状の外観を持つ筋肉の2番目の層が見えるはずです。薄い膜組織で接続された2つの縦方向の筋肉が観察できる筋肉の第2層の正中線を見つけます。次に、マイクロハサミを使用して膜組織を解剖し、2つの縦方向の筋肉を分離します。

リトラクターを調整して、背骨を覆う薄い銃口の3番目の層を露出させます。棘突起は、筋肉の第3層を鉗子で軽く触れることで感じることができます。マイクロハサミを使用して、筋肉の3番目の層に小さな切開を行います。そして、キュレットやメスを使って骨から筋肉を横向きにそっとこすり落とし、椎骨をはっきりと露出させます。

左C5をC8 DRGに露出させるには、一対の細いロンジャーを使用して、椎弓根と茎の一部を慎重に除去することにより、C4からT1椎骨の左半切除術を行います。注射用に十分なDRGが曝露されたら、カスタムメイドの33ゲージ鈍針を取り付けたウイルス充填マイクロリットルシリンジを定位固定注射器ホルダーに置いて、注射器を準備します。次に、30ゲージの面取り針を使用して、ターゲットDRGのそれぞれに小さな表面の開口部を作り、注射針の挿入を補助します。定位座標をゆっくりと調整して、33ゲージの針をDRGの中心に挿入します。

理想的には、注射された溶液がDRG全体に均一に拡散するように、針をDRGの中心に配置する必要があります。

針が挿入されたら、輸液シリンジポンプを使用して、各DRGに1マイクロリットルのウイルスを注入します。注射中、ウイルス溶液に着色染料が含まれている場合、DRGはゆっくりと色が変わります。DRGの腹側から液体が漏れる可能性があるため、針を挿入しすぎないでください。

注射中に漏れが発生した場合は、すぐに針の位置を調整してください。注射終了から3分後、注射針を引き抜きます。C5からC8の背根圧死を同時に行うには、先端の細い鉗子を使用して、各根を10秒間3回押しつぶします。鉗子の端を完全に反対します。組織内の白い線がクラッシュ部位に現れるはずです。