原子間力顕微鏡を用いたマウス脳から単離されたポリソームのイメージング

マウスの脳組織から単離された付着したポリソームを含むマイカシートから始めます。

ポリソームは、RNA鎖に結合した複数のリボソームの複合体です。

テープを使用して、マイカシートをサンプルホルダーに固定します。

サンプルホルダーを原子間力顕微鏡ステージに置きます。

事前に取り付けられたカンチレバーを配置します。レーザーと検出器を位置合わせして、イメージング中に正確な信号検出を確実にします。

カンチレバーの振動周波数を調整して、サンプルの完全性を維持しながら表面の特徴の検出を最適化します。

片

持ちの先端をサンプル表面上で振動させてイメージングを開始します。

先端がポリソームの隆起した表面に当たると、レーザーは偏向します。

レーザーのこれらのたわみは検出器によって捕捉され、ナノスケールの解像度の画像が生成されます。

適切なソフトウェアを使用して任意の傾きとドリフト効果を修正し、ポリソームの視覚化を可能にします。

準備したサンプルを両面テープを使用してAFMのサンプルホルダーに貼り付けます。次に、製造元の指示に従ってサンプルホルダーをAFMステージに挿入します。校正後、カンチレバーの先端が表面にかみ合うまでサンプルに近づきます。

2 x 2 ミクロンのスキャン領域、少なくとも 512 x 512 ピクセルの解像度を選択します。ライブ背景減算モードを選択し、20〜25ナノメートルのZスケールを選択します。次に、画像取得を開始します。画像を検査し、空中で画像を取得するときに、高さが10〜15ナノメートルであることを特徴とする丸い物体の存在を探します。

次に、鋭利な物体が見えるまで、設定値とフィードバックのパラメータを調整します。背景は、高さが2〜4ナノメートルの物体を含む良好なサンプルでは比較的平らに見えるはずです。画像が良好に見えたら、異なるサンプル領域で2 x 2ミクロンのスキャンを数回取得します。