原発腫瘍と肺転移を研究するためのMEF細胞の単離

この手順の全体的な目標は、マウスの乳がん腫瘍の無形成を研究することです。まず、マウス乳房腫瘍からの初代細胞の調製が実証されています。次に、肺転移を可視化するためのマウス肺の抽出方法を紹介します。

最後に、マウス胚からのマウス胚性線維芽細胞の調製は、これらの方法がマウス乳腺腫瘍ウイルス多腫瘍中T抗原のためのマウストランスジェニックを乳癌腫瘍の無形成を調査するために使用することができることを実証するので、最終的に示される。この方法は乳がんに関する洞察を得ることができますが、他の固形腫瘍の調査にも適用できます。この方法の視覚的なデモンストレーションは、腫瘍の錯覚ステップ中に腫瘍ロット他の組織のみを分離することが重要であるため、非常に重要である はさみを使用して、尿道開口部からマウス乳腺腫瘍ウイルスポリオーマミドルT抗原トランスジェニックマウスの首まで皮膚を開くことから始めます。

次に、皮膚を固定し、乳腺乳房腫瘍を分離します。腫瘍を冷たいPBSでin situ洗浄し、腫瘍を滅菌した10cmの組織培養プレートに入れます。次に、プレートを滅菌済みの層流フードに移し、滅菌済みのカミソリの刃とハサミを使用して腫瘍を1立方ミリメートルの小片に切り刻みます。

コラゲナーゼとロッカーで37°Cでインキュベートします。2時間後、得られた腫瘍組織懸濁液をスピンダウンします。ペレットをPBS Resusでさらに3回洗浄し、最後の洗浄後、変異を起こして摂氏37度で5分間ペレットを2ミリリットルのトリプシンEDTAに懸濁します。

次に、細胞をさらに3回洗浄し、通常の増殖培地に再懸濁します。最後に、10 cmの組織培養皿で細胞をインキュベートし、目的の細胞数が得られるまで次の3日間毎日培地を交換します。肺を摘出する前に、肝臓と横隔膜を取り外し、肋骨を取り除きます。

次に、気管の上部、頸静脈の近くを開き、カテーテルを使用して気管から適切な薬剤を注入して肺を満たし、肺を取り出し、Z fixを使用する場合は組織をパラフィンに埋め込みます。墨汁を使用して組織inec溶液を5分間保持すると、正常な肺組織は黒色に見え、腫瘍結節が現れます。白は、直径0.5ミリメートル以上の二次部位で視覚化された腫瘍結節を転移として分類し、マウス胚性線維芽細胞を生成します。

まず、妊娠中のマウスの皮膚を、先ほど示したように尿道口から首まで開き、胚を乱さないように注意します。次に、子宮角を取り外し、滅菌PBSですすいでください。次に、胎盤から胚を一度に1つずつ慎重に分離します。

各胚を、氷冷PBSを含む10cmの培養皿に入れます。頭部、肝臓、腸を切除した後、PBSを含有する12ウェル組織培養プレートの1ウェルで胚の残りの部分をすすぎ、体を1立方ミリメートル片に切断する。5ミリリットルのトリプシンEDTAを含む別のウェルに移し、組織を摂氏37度でインキュベートします。

5分後、1ミリリットルのFBSを追加して消化を不活性化します。次に、得られた細胞懸濁液をスピンダウンし、ペレットを再懸濁します。1ミリリットルの温かいDMEMで、最後に抗生物質を添加した10ミリリットルのDMEMが入った10cmの培養皿に細胞を移し、目的の細胞数が得られるまで細胞を培養します。

動物を犠牲にする腫瘍の進行段階は、特定の研究とI-A-C-U-Cガイドラインによって異なります。例えば、マウス乳腺腫瘍ウイルス多腫瘍中T抗原を有するこの100日齢FVBマウスは、腫瘍を単離してから3ヶ月後に犠牲にされました。原発腫瘍細胞が得られた。

多くの遺伝子が乳がんの肺への転移を媒介するため、転移過程を研究するために、先ほど実証したように肺も抽出されました。次に、肺をZフィックスで膨らませ、腫瘍結節を視覚化するために墨汁で染色しました。ここでは、FVB株マウス胚から単離されたマウス胚性線維芽細胞が示されている。

このビデオを見た後、初代マウス腫瘍細胞とマウス胚性線維芽細胞を単離し、マウスの肺を抽出する方法を理解することができます。ISOフッ素の取り扱いは、この手順を実行している間、化学的なFフードでの作業が常に攻撃されるはずであるなど、その予防措置の下で非常に危険である可能性があることを忘れないでください。